Tuina Intervention i natriummonojodoacetat injektionsinducerad råtta modell av knäartros

Summary

Detta protokoll beskriver metoderna för Tuina-intervention i natriummonojodoacetatinjektionsinducerad råttmodell av knäartros (KOA), vilket ger en referens för tillämpningen av Tuina i KOA-djurmodeller. Detta protokoll studerar också den effektiva mekanismen för Tuina för KOA, och resultaten kommer att bidra till att främja dess tillämpning.

Abstract

Knäartros (KOA), en vanlig degenerativ ledsjukdom, kännetecknas av kronisk smärta och funktionsnedsättning, som kan utvecklas till irreparabel strukturell skada i leden. Undersökningar av kopplingen mellan ledbrosk, muskler, synovium och andra vävnader som omger knäleden vid KOA är av stor betydelse. För närvarande omfattar hanteringen av KOA livsstilsförändringar, motion, medicinering och kirurgiska ingrepp; Det saknas dock fortfarande en klarförklaring av de intrikata mekanismer som ligger till grund för KOA-relaterad smärta. Följaktligen är KOA-smärta fortfarande en viktig klinisk utmaning och en terapeutisk prioritet. Tuina har visat sig ha en reglerande effekt på motoriska, immunologiska och endokrina system, vilket föranleder undersökningen av huruvida Tuina kan lindra KOA-symtom, orsakade av uppreglering av inflammatoriska faktorer, och vidare, om de inflammatoriska faktorerna i skelettmuskulaturen kan öka utvecklingen av KOA.

Vi randomiserade 32 hanråttor av typen Sprague Dawley (SD) (180-220 g) till fyra grupper med åtta djur i varje: antiPD-L1+Tuina (grupp A), modell (grupp B), Tuina (grupp C) och skenkirurgi (grupp D). För grupperna A, B och C injicerade vi 25 μL natriummonojodacetatlösning (MIA) (4 mg MIA utspädd i 25 μL steril koksaltlösning) i höger knäledshåla, och för grupp D injicerades samma mängd steril fysiologisk koksaltlösning. Alla grupper utvärderades med hjälp av de minst till mest stressande testerna (tassmekanisk tillbakadragandetröskel, termisk latens för tasstillbakadragande, svullnad i höger knäled, Lequesne MG-poäng, hudtemperatur) före injektion och 2, 9 och 16 dagar efter injektionen.

Introduction

Knäartros (KOA) är en vanlig degenerativ artros, som kännetecknas av kronisk smärta och funktionsnedsättning, och relativt svår KOA leder till irreversibel strukturell skada på leden¹. Den höga globala prevalensen av KOA har blivit en stor global folkhälsoutmaning ^2,3, vilket allvarligt försämrar livskvaliteten för patienter ^4,5. Studier har visat att KOA drabbar mer än 260 miljoner människor världen över⁶. Med den åldrande befolkningen är den totala prevalensen av KOA i Kina så hög som 17,0 % över 40 år, vilket lägger en tung börda på familjerna till de drabbade ^7,8.

Enligt kinesisk medicin tillhör KOA kategorin “förlamning”⁹, och den gule kejsarens klassiker för internmedicin associerar senor, ben och kött med förlamning. Därför måste vi vara uppmärksamma på kopplingen mellan brosk, muskel, synovium och andra vävnader runt knäleden i KOA. I modern medicin driver både muskel- och beninflammation, som är viktiga komponenter i immunhomeostasen vid artrit, utvecklingen av KOA-smärta. De flesta studier fokuserar dock på broskinflammation och ledinflammation i benleder, och det finns en brist på artiklar som undersöker inflammatoriska fenomen i skelettmuskulaturen. Därför behövs mer forskning om skelettmuskulaturens roll vid inflammation för att få en mer omfattande förståelse för KOA och ge idéer till mer effektiva behandlingsmetoder. I en genomgång av litteraturen fann vi att hämning av den immunrelaterade faktorn programmerad dödsligand 1 (PD-L1) förvärrade progressionen av KOA 10,11 och att det fanns differentiellt uttryck av IL-15 och ^FOXO1 i skelettmuskulaturen hos patienter med KOA^12, liksom signifikant skelettmuskelinflammation hos patienter med KOAⁱ slutstadiet. vilket också var förknippat med förändringar i gång. Det har visat sig att skelettmuskulaturen också kan utsöndra faktorer som är nära besläktade med inflammatorisk immunitet såsom IL-6, och att TNF-α också är nära besläktat med PD-L1-vägen och KOA^13,14,15.

För närvarande inkluderar tillgängliga behandlingar för KOA viktkontroll, träning, medicinering och kirurgi, som vanligtvis inkluderar intraartikulära injektioner, smärtstillande medicinering, artroskopisk kirurgi och periprotetisk osteotomi av knä¹⁶. För närvarande kan utvecklingen av KOA-sjukdomen inte helt stoppas eller vändas, och utan en tydlig förståelse för de komplexa mekanismerna bakom KOA-smärta riskerar KOA-patienter att överanvända smärtstillande läkemedel och en hög förekomst av biverkningar⁸. De flesta behandlingsstrategier är endast effektiva under korta perioder och fokuserar endast på tillfällig lindring av symtom snarare än på sjukdomens patogenes. Därför är KOA-smärta fortfarande en prioritet och en utmaning för behandling, vilket utgör en allvarlig klinisk utmaning. Tuina kan dock direkt stimulera skelettmusklerna runt den drabbade leden vid KOA-behandling och kan ge vissa fördelar. I kombination med den tidigare beskrivningen är det den idealiska terapin för att studera skelettmuskelvävnadens roll vid KOA, och att klargöra skelettmuskelvävnadens roll vid inflammation kan också ge bättre teoretiskt stöd för Tuina av KOA.

Studier har visat att massageterapi, osteopatisk manipulativ terapi och ryggradsmanipulation kan hjälpa till att lindra smärta och återställa kroppsfunktion^17,18. Dessa manipulationer kan verka på lokal inflammation och lindra spasmer och smärtlindring genom yttre mekanisk verkan. De kan lindra smärta efter total knäprotesplastik, minska användningen av smärtstillande läkemedel, främja postoperativ återhämtning och förbättra biomekanisk balans¹⁹. Svensk massage är möjlig vid behandling av artros och kan minska stress och förbättra livskvaliteten²⁰. Den terapeutiska effekten av Tuina på KOA har föregåtts av vissa studier.

I detta experiment kommer vårt team att undersöka om uttrycket av PD-L1 och relaterade inflammatoriska faktorer i skelettmuskulaturen kan inducera KOA och främja dess utveckling baserat på den MIA-inducerade KOA-modellen hos råttor. Tuina kommer också att implementeras för att se om det kan lindra KOA-symtom orsakade av ökat inflammatoriskt faktoruttryck. Tuina kommer att kombineras med PD-L1-hämning för att påvisa sambandet mellan Tuina-medierad PD-1-väg i skelettmuskelinflammation som påverkar KOA-utveckling och smärta, vilket lägger grunden för ytterligare studier på flera nivåer av de terapeutiska mekanismerna för Tuina-intervention vid KOA.

Sammanfattningsvis beskriver denna artikel undersökningen och utarbetandet av mekanismerna för skelettmuskelinflammation i utvecklingen av KOA och dess smärta, samt de terapeutiska effekterna av Tuina på KOA, ur perspektivet av immuninflammatoriskt faktoruttryck, i kombination med beteenderelaterade indikatorer, för att ge moderna forskningsbevis för teorin om “obalans mellan sena och ben” i traditionell kinesisk medicin.

Protocol

Alla experiment godkändes och övervakades av Animal Care and Use Committee vid Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (godkännandenummer: SYXK2018-0040), vilket överensstämmer med bestämmelserna i World Medical Association Helsinki Declaration. 1. Beredning av djur Hus 32 Sprague Dawley (SD) hanråttor i åldern 8 veckor och med en vikt på 180–220 g i en specifik patogenfri inhysningsapparat under cykler med 12 timmars ljus/12 timmars mörker vi…

Representative Results

Det beskrivna protokollet implementerades i en klinisk miljö vid Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine. Figur 1 visar den exakta placeringen av de akupunkter som tryckts in hos råttor, och tabell 1 illustrerar de vanliga fördelarna med att stimulera dessa punkter. Tabell 2 och tabell 3 ger övertygande bevis för anmärkningsvärd smärtlindring som uppnåtts genom Tuina-behandling, även i frånvaro av P…

Discussion

Denna studie syftar till att bedöma förbättringen av KOA efter Tuina-intervention genom att använda standardiserade beteendeindikatorer och undersöka mekanismerna för Tuina för KOA och sambandet mellan skelettmuskulatur och KOA. Till skillnad från farmakologiska och kirurgiska behandlingar har Tuina en positiv reglerande effekt på motorsystemet, immunsystemet och det endokrina systemet. Tuina kan lindra inflammation och smärta som orsakas av sjukdom genom att verka på olika mål. Till exempel, genom att regler…

Materials

Anti-PD-L1	Abcam, Cambridge, MA, USA	ab80276
electric von Frey esthesiometer	IITC/Life Science, Woodland Hills, CA, USA	ALMEMO 2450
GraphPad Prism 9.0	GraphPad Software		Software for stastistical analysis
monosodium iodoacetate	Sigma-Aldrich Inc	I9148	Resolved into normal saline for injection
pentasorbital sodium	Sigma-Aldrich Inc	P3761
Sprague Dawley (SD) male rats	Shanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd	No. SCXK (Hu) 2017-0012
thermal analgesia tester	IITC/Life Science	Model 390