L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale est l’un des modèles murins les plus utilisés de la sclérose en plaques. Dans le protocole actuel, les souris C57BL/6J des deux sexes sont immunisées avec le peptide glycoprotéique oligodendrocytaire de myéline, ce qui entraîne principalement une parésie ascendante de la queue et des membres. Nous discutons ici du protocole d’induction et d’évaluation de l’EAE.
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Article de méthode
Modélisation de la sclérose en plaques chez les deux sexes : encéphalomyélite auto-immune expérimentale induite par MOG35-55
Dans cet article
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Résumé
Résumé
La sclérose en plaques (SEP) est une maladie inflammatoire auto-immune chronique qui affecte le système nerveux central (SNC). Elle se caractérise par une prévalence différente chez les sexes, touchant plus de femmes que d’hommes, et des résultats différents, montrant des formes plus agressives chez les hommes que chez les femmes. De plus, la SEP est très hétérogène en termes d’aspects cliniques, de caractéristiques radiologiques et pathologiques. Ainsi, il est nécessaire de tirer parti de modèles animaux expérimentaux qui permettent d’étudier autant d’aspects de la pathologie que possible. L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) représente l’un des modèles les plus utilisés de la SEP chez la souris, modélisant différentes caractéristiques de la maladie, de l’activation du système immunitaire aux lésions du SNC. Nous décrivons ici un protocole pour l’induction de l’EAE chez les souris mâles et femelles C57BL/6J en utilisant l’immunisation par le peptide glycoprotéique de l’oligodendrocyte de myéline 35-55 (MOG35-55), ce qui conduit au développement d’une forme chronique de la maladie. Nous rapportons également l’évaluation du score clinique quotidien et des performances motrices de ces souris pendant 28 jours après l’immunisation (28 dpi). Enfin, nous illustrons quelques analyses histologiques de base au niveau du SNC, en nous concentrant sur la moelle épinière en tant que site principal des lésions induites par la maladie.
Introduction
La sclérose en plaques (SEP) est une maladie inflammatoire auto-immune chronique qui affecte le système nerveux central (SNC). Il montre la présence d’une infiltration périvasculaire de cellules inflammatoires, d’une démyélinisation, d’une perte axonale et d’une gliose1. Son étiologie reste inconnue, et ses aspects cliniques, radiographiques et pathologiques suggèrent une remarquable hétérogénéité de la maladie2.
En raison de son étiologie et de sa complexité inconnues, aucun modèle animal ne récapitule actuellement toutes les caractéristiques cliniques et radiologiques présentées dans la SEP<....
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Protocole
Les soins et la manipulation des animaux dans le cadre du présent travail ont été effectués conformément à la directive du Conseil de l’Union européenne du 22septembre 2010 (2010/63/UE) ; toutes les procédures rapportées dans la présente étude ont été approuvées par le ministère italien de la Santé (407/2018-PR) et par le Comité d’éthique de l’Université de Turin (projet n° 360384). Nous suggérons de se conformer au plan expérimental aux lignes directrices ARRIVE publiées à l’origine par Kilkenny et al. en 201020. Avant de commencer, assurez-vous que le matériel nécessaire est disponible (voir le tableau des matériaux
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Résultats
Suivi de l’EAE après l’immunisation
Cette évaluation a été faite de la manière décrite ci-dessous.
Poids corporel et apport alimentaire
L’analyse bifactorielle de la variance (ANOVA) (le sexe et le temps en tant que variables indépendantes) montre une diminution de la poids corporel des animaux EAE des deux sexes, en particulier au cours de la deuxième semaine suivant l’induction (F(1,57) = 4,952, p < 0,001 ;
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Discussion
Le protocole EAE induit par MOG35-55 que nous avons décrit a conduit au développement d’une forme chronique de SEP chez les souris C57BL/6J 7,8,13. Dans ces résultats représentatifs, nous avons rapporté que les animaux des deux sexes qui ont subi la procédure d’immunisation ont développé une forme chronique de la maladie (c’est-à-dire qu’ils ne se rétablissent pas complètement après l’apparition de la maladie, qu’ils .......
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Déclarations de divulgation
Aucun des auteurs n’a de conflit d’intérêts à déclarer en ce qui concerne la recherche, la paternité et/ou la publication de cet article.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par le Ministero dell’Istruzione, dell’Università e della Ricerca - MIUR projet Dipartimenti di Eccellenza 2018-2022 et 2023-2027 au Département de neurosciences Rita Levi Montalcini ; Fondation Cavalieri-Ottolenghi, Orbassano, Italie. BB a été fellow de l’INFRA-P, Région du Piémont (n.378-35) (2022-2023) et du PRIN 2020 - 20203AMKTW. Nous remercions la Fondazione per la Ricerca Biomedica Onlus (FORB) pour son soutien. Les frais de publication ont été financés par le don de Distretto Rotaract 2031, et en particulier du Rotaract Club Torino Nord-Est. Nous remercions Elaine Miller pour la relecture de notre manuscrit.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 18 g x 1 & frac12 ; “ Aiguille 1,2 x 40 mm pour la seringue en verre ; | Terumo | TER-HYP-18G-112-PIN | |
| Appareil photo numérique connecté au microscope optique | Appareil photo | ||
| Balance électronique de précision | Merck | Mod. Kern-440-47N, résolution 0,1 g | |
| Eosin Y | Sigma-Aldrich | HT110216 | |
| Pipette seringue en verre " ultra asept" 10 ml | de système Sacco ; | ||
| Verrerie (c’est-à-dire becker pour préparer l’émulsion) | VWR | 213-1170, 213-1172 | |
| Hématoxyline (Mayer' s) | Filtre Sigma-Aldrich | MHS32 | avant de l’utiliser. ; |
| Logiciel d’analyse d’images | Fidji | ||
| Incomplet Freund' s adjuvant (IFA) | Sigma-Aldrich | F5506 | Se conserve à +4 ° ;C. ; |
| Isoflurane | Wellona Pharma | Ce médicament est utilisé comme anesthésique par inhalation. | |
| Souris C57BL/6J mâles et femelles | Jackson Laboratory, Envigo | Age 8-10 semaines, poids corporel optimal de ~20 g. | |
| Microtome | Leica HistoCore BIOCUT R | ||
| Support de montage ; | Merck | 107961 | |
| Souris Rotarod | Ugo Basile ; | #47600 | |
| Mycobacterium tuberculosis (MT), souche H37Ra ; | Laboratoires Difco Inc. ; | 231141 | Boutique à +4 ° ;C. |
| Peptide de glycoprotéine d’oligodendrocytes de myéline 35-55 (MOG35-55) | Espikem | EPK1 | Conserver à -80 ° ; C dilué (2 mg/mL) dans une solution physiologique ; Préparez-le le jour de la vaccination pour éviter, autant que possible, les altérations ou contaminations. |
| Microscope optique | NIKON eclipse 90i | ||
| Paraformaldéhyde (PFA) | Sigma-Aldrich | 158127 | Stocker à +4 ° ; C une fois dilué (4 %) dans un tampon phosphate |
| Toxine coqueluche (PT) | Duotech ; | PT.181 | Stocker à -80° ; C dilué (concentration 5 & micro ; g/mL) en solution physiologique |
| Solution physiologique (solution de chlorure de sodium à 0,9 %) | B. Eurospital | A 032182038 | Conserver à +4 ° ; C une fois ouvert. |
| Tampon salin phosphate (PBS) | Thermo Scientific | J61196. | |
| pour l’acquisition d’images | ; NIS-Element AR 2.10 | ||
| Seringues U-100 0,5 mL avec 30 G x 5/16" (0,30 x 8 mm) en aiguille fixe | ; Nipro | SYMS-0.5U100-3008B-EC | |
| Seringues U-100 1 mL avec 26G x ½ ; ” (0,45 x 12,7 mm) dans l’aiguille | PIC | 20,71,26,03,00,354 | |
| Pommade vétérinaire pour les yeux | Lacrilube, Lacrigel Europhta | ||
| Xylazine | Rompun | Ce mélange de médicament est utilisé comme anesthésique injectable et sédatif. | |
| Zolazépam et tiletamine | Zoletil ; 100 | Ce médicament est utilisé comme anesthésique injectable, sédatif, relaxant musculaire et analgésique |
Références
- Thompson, A. J., Baranzini, S. E., Geurts, J., Hemmer, B., Ciccarelli, O. Multiple sclerosis. Lancet. 391 (10130), 1622-1636 (2018).
- Gold, S. M., Willing, A., Leypoldt, F., Paul, F., Friese, M. A. Sex differences in autoimmune disorders of the central nervous system. Semin immunopathol. 41 (2), 177-....
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Réimpressions et autorisations
Erratum
Formal Correction: Erratum: Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis
Posted by JoVE Editors on 2/16/2024. Citeable Link.
An erratum was issued for: Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. The Authors section was updated. An additional affiliation (School of Pharmacy, Pharmacology Unit, University of Camerino) was added for author Antonino Casile.
