À Planta Expression génique et édition de gènes dans les feuilles de bambou moso

Huayu Sun; Sining Wang; Zhimin Gao

doi:10.3791/65799

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Article de méthode

À Planta Expression génique et édition de gènes dans les feuilles de bambou moso

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DOI :

10.3791/65799

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18 août 2023

Huayu Sun¹^,² , Sining Wang¹^,² , Zhimin Gao¹^,²

¹Key Laboratory of State Forestry and Grassland Administration/Beijing on Bamboo & Rattan Science and Technology, ²Institute of Gene Science and Industrialization for Bamboo and Rattan Resources, International Centre for Bamboo and Rattan

Dans cet article

Résumé

Dans cette étude, une nouvelle méthode d’expression génique in planta et d’édition de gènes médiée par Agrobacterium a été développée dans le bambou. Cette méthode a grandement amélioré l’efficacité de la validation de la fonction génique chez le bambou, ce qui a des implications importantes pour accélérer le processus de sélection du bambou.

Résumé

Une nouvelle méthode de transformation génique in planta a été développée pour le bambou, ce qui évite d’avoir recours à des processus d’induction et de régénération des callosités longs et laborieux. Cette méthode implique l’expression génique médiée par Agrobacterium par blessure et vide pour les semis de bambou. Il a démontré avec succès l’expression de gènes exogènes, tels que le rapporteur RUBY et le gène Cas9 , dans les feuilles de bambou. L’efficacité de transformation la plus élevée pour l’accumulation de bétalaïne dans les plantules RUBY a été obtenue en utilisant la souche GV3101, avec un pourcentage de 85,2 % après l’infection. Bien que l’ADN étranger ne se soit pas intégré dans le génome du bambou, la méthode s’est avérée efficace pour exprimer les gènes exogènes. De plus, un système d’édition de gènes a également été développé avec un rapporteur natif utilisant cette méthode, à partir duquel un mutant in situ généré par le gène modifié de la violaxanthine dé-époxydase du bambou (PeVDE) dans les feuilles de bambou, avec un taux de mutation de 17,33%. La mutation de PeVDE a entraîné une diminution des valeurs d’extinction non photochimique (NPQ) sous une forte luminosité, qui peut être détectée avec précision par un fluorimètre. Cela fait du PeVDE édité un rapporteur natif potentiel pour les gènes exogènes et endogènes du bambou. Avec le rapporteur de PeVDE, un gène de la cinnamoyl-CoA réductase a été édité avec succès avec un taux de mutation de 8,3%. Cette opération permet d’éviter le processus de culture tissulaire ou d’induction de callosités, qui est rapide et efficace pour l’expression de gènes exogènes et l’édition de gènes endogènes chez le bambou. Cette méthode peut améliorer l’efficacité de la vérification de la fonction des gènes et aidera à révéler les mécanismes moléculaires des principales voies métaboliques du bambou.

Introduction

L’étude de la fonction des gènes chez le bambou est très prometteuse pour la compréhension avancée du bambou et la libération de son potentiel de modification génétique. Un moyen efficace d’y parvenir peut être réalisé par le processus d’infection médiée par Agrobacterium dans les feuilles de bambou, par lequel le fragment d’ADN-T contenant des gènes exogènes est introduit dans les cellules, conduisant ensuite à l’expression des gènes dans les cellules foliaires.

Le bambou est une ressource précieuse et renouvelable avec un large éventail d’applications dans la fabrication, l’art et la recherche. Le bambou possède d’excellentes pro....