परजीवी ततैया ट्राइकोग्रामा डेंड्रोलिमी से जहर निकालना एक कृत्रिम मेजबान का उपयोग करना
Summary
यहां, हम पॉलीथीन फिल्म और अमीनो एसिड समाधान के साथ बनाए गए कृत्रिम मेजबान का उपयोग करके ट्राइकोग्रामा डेंड्रोलिमी से जहर निकालने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।
Abstract
परजीवी ततैया हाइमनोप्टेरान कीड़ों का एक विविध समूह है जो कीट जैव नियंत्रण के लिए अमूल्य संसाधनों के रूप में काम करते हैं। सफल परजीवीवाद सुनिश्चित करने के लिए, परजीवी ततैया अपने मेजबानों की प्रतिरक्षा को दबाने के लिए अपने मेजबानों में जहर इंजेक्ट करते हैं, मेजबानों के विकास, चयापचय और यहां तक कि व्यवहार को संशोधित करते हैं। 600,000 से अधिक अनुमानित प्रजातियों के साथ, परजीवी ततैया की विविधता अन्य विषैले जानवरों, जैसे सांप, शंकु घोंघे और मकड़ियों से आगे निकल जाती है। परजीवी ततैया का जहर कीट नियंत्रण और चिकित्सा में संभावित अनुप्रयोगों के साथ बायोएक्टिव अणुओं का एक अस्पष्टीकृत स्रोत है। हालांकि, परजीवी जहर इकट्ठा करना प्रत्यक्ष या विद्युत उत्तेजना का उपयोग करने में असमर्थता और उनके छोटे आकार के कारण विच्छेदन में कठिनाई के कारण चुनौतीपूर्ण है। ट्राइकोग्रामा छोटे (~ 0.5 मिमी) अंडे परजीवी ततैया का एक जीनस है जो व्यापक रूप से कृषि और जंगलों दोनों में लेपिडोप्टेरान कीटों के जैविक नियंत्रण के लिए उपयोग किया जाता है। यहां, हम कृत्रिम मेजबानों का उपयोग करके टी. डेंड्रोलिमी से जहर निकालने की एक विधि की रिपोर्ट करते हैं। इन कृत्रिम मेजबानों को पॉलीथीन फिल्म और अमीनो एसिड समाधान के साथ बनाया जाता है और फिर परजीवीवाद के लिए ट्राइकोग्रामा ततैया के साथ टीका लगाया जाता है। बाद में जहर एकत्र किया गया और केंद्रित किया गया। यह विधि विच्छेदन के कारण होने वाले अन्य ऊतकों से संदूषण से बचने के दौरान बड़ी मात्रा में ट्राइकोग्रामा जहर के निष्कर्षण को सक्षम बनाती है, विष जलाशय विच्छेदन प्रोटोकॉल में एक आम मुद्दा। यह अभिनव दृष्टिकोण ट्राइकोग्रामा जहर के अध्ययन की सुविधा प्रदान करता है, जिससे नए शोध और संभावित अनुप्रयोगों का मार्ग प्रशस्त होता है।
Introduction
परजीवी ततैया परजीवी हाइमनोप्टेरान कीड़े हैं जो जैविक नियंत्रण के लिए महत्वपूर्ण संसाधन हैं1. परजीवी ततैया की एक विस्तृत विविधता है, जिसमें 600,000 से अधिक अनुमानित प्रजातियांहैं 2. परजीवी ततैया की विविधता अन्य विषैले आर्थ्रोपोड्स, जैसे सांप, शंकु घोंघे, मकड़ियों, बिच्छू और मधुमक्खियों से कहीं अधिक है। परजीवी ततैया में जहर एक महत्वपूर्ण परजीवी कारक है। सफल परजीवीवाद के लिए, जहर को मेजबान में इंजेक्ट किया जाता है, मेजबान के व्यवहार, प्रतिरक्षा, विकास और चयापचय को संशोधित करता है3. इसके अलावा, परजीवी ततैया का जहर इसकी आणविक संरचनाओं, लक्ष्यों और कार्यों में उल्लेखनीय विविधता प्रदर्शित करता है, जो उनके मेजबानों के साथ जटिल सह-विकास को दर्शाता है। इस प्रकार, परजीवी जहर कीटनाशक याचिकित्सा प्रयोजनों के लिए सक्रिय अणुओं का एक मूल्यवान और कम सराहना किया गया संसाधन है। सांप, शंकु घोंघे, मकड़ियों, बिच्छू और मधुमक्खियों के जहर के विपरीत, परजीवी ततैया का जहर प्रत्यक्ष उत्तेजना या विद्युत उत्तेजना द्वारा एकत्र नहीं किया जा सकता है5. परजीवी ततैया के जहर के निष्कर्षण की वर्तमान विधि जहर जलाशय को विच्छेदन करना है। हालांकि, परजीवी ततैया अक्सर छोटे होते हैं, और परजीवी ततैया के विच्छेदन के लिए उच्च तकनीकी कौशल की आवश्यकता होती है। इसलिए, यदि हम परजीवी ततैया के जहर को कुशलतापूर्वक और आसानी से इकट्ठा करने का एक तरीका खोज सकते हैं, तो परजीवी ततैया के जहर पर शोध करने में बहुत मदद मिलेगी।
ट्राइकोग्रामा (हाइमनोप्टेरा: ट्राइकोग्रामेटिडे) छोटे (~ 0.5 मिमी लंबे) परजीवी ततैया6 का एक जीनस है। ये ततैया सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले जैव नियंत्रण एजेंटों में से हैं, विशेष रूप से कृषि और जंगलों दोनों में विभिन्न लेपिडोप्टेरान कीटों के अंडों को लक्षित करते हैं। उदाहरण के लिए, टी. डेंड्रोलिमी, चीन में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली ट्राइकोग्रामा प्रजातियों में से एक, को विभिन्न प्रकार के कृषि और वानिकी कीटों को नियंत्रित करने के लिए बड़े पैमाने पर लागू किया गया है, जैसे कि डेंड्रोलिमस सुपरन्स, ओस्ट्रिनिया फर्नाकैलिस और चिलो सप्रेसलिस। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि ट्राइकोग्रामा ततैया अपने अंडे कृत्रिम मेजबान7 में इंजेक्ट कर सकती है। कृत्रिम मेजबान मोम8, अगर9, पैराफिल्म10 और प्लास्टिक की फिल्म11 जैसी सामग्रियों का उपयोग करके बनाया जा सकता है। कृत्रिम मेजबान है कि Trichogramma के लिए पर्याप्त oviposition लाती है में समाधान सरल हो सकता है, जैसे अमीनो एसिड या अकार्बनिक लवण12. विशेषता के आधार पर कि टी. डेंड्रोलिमी कृत्रिम मेजबानों को परजीवी बना सकता है, यह अध्ययन कृत्रिम मेजबानों का उपयोग करके परजीवी ततैया से जहर निकालने के लिए एक नई विधि प्रदान करता है। इस दृष्टिकोण का उद्देश्य कम उपज, कम शुद्धता और वर्तमान निष्कर्षण तकनीकों में संदूषण की संवेदनशीलता की कमियों को दूर करना है। इस पद्धति का उपयोग करके, टी. डेंड्रोलिमी से बड़ी मात्रा में उच्च शुद्धता वाला जहर निकाला जा सकता है, जो कीटनाशक या चिकित्सा उद्देश्यों के लिए वैज्ञानिक अनुसंधान और बायोएक्टिव अणुओं की जांच की जरूरतों को पूरा करता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहां, हम कृत्रिम मेजबानों का उपयोग करके टी. डेंड्रोलिमी से जहर निकालने की एक विधि प्रस्तुत करते हैं। विष संग्रह प्रयोग में मुख्य बिंदु इस प्रकार हैं। (1) तैयारी के दौरान, टी. डेंड्रोलिमी को सीओ2</sub…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम हैनान प्रांत के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 323QN262), चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 31701843 और 32172483), जिआंगसु कृषि विज्ञान और प्रौद्योगिकी नवाचार कोष (अनुदान संख्या 12000 अनुदान संख्या 1500000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 सीएक्स (22) 3012 और सीएक्स (21) 3008), जियांग्सू प्रांत के “शुआंगचुआंग डॉक्टर” फाउंडेशन (अनुदान संख्या 202030472), और नानजिंग कृषि विश्वविद्यालय स्टार्टअप फंड (अनुदान संख्या 804018)।
Materials
| 10 μm Nylon Net | Millipore | NY1002500 | For filtering the eggs |
| 10% Polyvinyl alcohol | Aladdin | P139533 | For attractting T. dendrolimi to lay eggs |
| 10% Sucrose water | Sinopharm Chemical Reagent | 10021463 | Feed Trichogramma dendrolimi |
| 4x LDS loading buffer | Ace Hardware | B23010301 | SDS-PAGE |
| Collection box | Deli | 8555 | Container for T. dendrolimi parasitism |
| Future PAGE 4–12% (12 wells) | Ace Hardware | J70236502X | SDS-PAGE |
| GenScript eStain L1 protein staining apparatus | GenScript | L00753 | SDS-PAGE |
| Glass grinding rod | Applygen | tb6268 | Semicircular protrudations |
| L- Leucine | Solarbio | L0011 | Artificial host components |
| L-Histidine | Aladdin | A2219458 | Artificial host components |
| L-Phenylalanine | Solarbio | P0010 | Artificial host components |
| Mini-Centrifuges | Scilogex | D1008 | Centrifuge |
| MOPS-SDS running buffer | Ace Hardware | B23021 | SDS-PAGE |
| Omni-Easy Instant BCA protein assay kit | Shanghai Yamay Biomedical Technology | ZJ102 | For esimation of venom protein concentration |
| PCR plate layout of 96 holes | Thermo Fisher | AB1400L | Semicircular protrudations |
| Polyethylene plastic film | Suzhou Aopang Trading | 001c5427 | Artificial egg card |
| Prestained color protein marker(10–180 kDa) | YiFeiXue Biotech | YWB007 | SDS-PAGE |
| Rubber band | Guangzhou qianrui biology science and technology | 009 | Tighten the plastic film and the collection box |
| Silicone rubber septa mat, 96-well, round hole | Sangon Biotech | F504416-0001 | Semicircular protrudations |
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