Bilinçli Sıçanlarda Subklavyen Ven Kan Örneklemesi
Summary
Burada, sıçanlarda anestezi olmadan hızlı, güvenli ve tekrarlanan kan alımını sağlayan etkili sıçan kısıtlaması ve subklavyen ven ponksiyon yöntemlerinin bir kombinasyonunu sunuyoruz.
Abstract
Sıçanlardan tekrarlanan kan örnekleri elde etmek için birkaç yerleşik yöntem vardır, en sık kullanılan yöntemler anestezisiz lateral kuyruk ven örneklemesi ve anestezi ile juguler ven örneklemesidir. Ancak bu yöntemlerin çoğu yardım ve anestezik ekipman gerektirmekte ve bazen kan alınması veya kan örneklerinin kalitesizliği açısından zorluklar yaratmaktadır. Ek olarak, bu kan toplama yöntemleri, çok sayıda sıçan için tekrarlanan kan örneklemesi gerektiğinde önemli ölçüde zaman ve insan kaynağı tüketir. Bu çalışma, anestezi uygulanmamış sıçanlarda tek bir yetkin birey tarafından tekrarlayan kan örneklemesi için bir teknik sunmaktadır. Subklavyen venin delinmesi ile oldukça tatmin edici kan örnekleri alınabilir. Yöntem, sıçan kısıtlamasından kan alımının tamamlanmasına kadar sadece 2 dakikalık bir medyan süre ile %95’lik etkileyici bir genel başarı oranı gösterdi. Ayrıca, belirlenen aralıkta ardışık kan alımlarının yapılması sıçanlara herhangi bir zarar vermez. Bu yöntem, özellikle büyük ölçekli farmakokinetik çalışmalarda kan toplama için teşvik edilmeye değerdir.
Introduction
Sıçanlar en yaygın deney hayvanlarından biridir ve kan örnekleri almanın birçok yolu vardır. Sonuç aşamasında tek bir kan alımını içeren deneyler için, kardiyak ponksiyon veya abdominal aort kan alımı yoluyla yeterli miktarda kan elde edilebilir1. Bununla birlikte, bazı çalışmalar, özellikle ilaçların emilimini, dağılımını ve metabolizmasını belirlemek için tekrarlanan kan alımının gerekli olduğu farmakokinetik ve toksikoloji çalışmalarında, rutin kan veya biyokimyasal analiz için sıçanlardan tekrarlanan kan alınmasını gerektirir2.
Şu anda, kuyruk ven kanı alımı, sıçanlardan kan örneklemesi için en yaygın yöntem olmasına rağmen, anestezi gerektirmemesine rağmen, bu yöntem tekrarlanan toplamalar için zorlayıcı olabilir ve toplanan kan hacmi nispeten küçüktür 3,4. Ek olarak, safen ve penil damarlardan kan alınabilmesine rağmen, elde edilen kan miktarı sınırlıdır ve anestezi gerekir 1,5. Ayrıca, submandibular venöz pleksusun yanı sıra dil altı, juguler ve subklavyen damarlardan toplanan kan örnekleri daha yüksek kaliteli örnekler sağlar, ancak tipik olarak anestezi veya birden fazla kişinin yardımını gerektirir 1,6,7,8,9. Son olarak, retro-orbital sinüs/kanal kan alımı sadece anestezi gerektirmekle kalmaz, aynı zamanda sıçanlarda potansiyel olarak yaralanma ve strese neden olabilir9.
Tipik olarak ana damarlardan elde edilen kan örneklerinin kalitesi genellikle en yüksek standarttır1. Şu anda, bazı çalışmalar, juguler ven yoluyla sürekli mikrosampasyonun sıçanlarda toksikolojik araştırmalar için çok uygun bir yöntem olduğunu bulmuştur, ancak bu yöntem genellikle juguler ven kateterizasyonu gerektirir 10,11,12. Bu nedenle, cerrahi müdahale olmadan hayvan araştırmalarının 3R ilkesine uygun olarak yüksek kaliteli kan örneklerinin nasıl elde edileceğini araştırmaya değer. Bu çalışmanın amacı, sıçanlarda subklavyen venden etkili bir şekilde kan ekstraksiyonu için bir yöntem sunmaktı. Bu teknik, anesteziye gerek kalmadan tek kişilik bir prosedürle tatmin edici örneklerin hızlı bir şekilde toplanmasını sağlar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Kuyruk damarı kan alımı, sıçanlarda tekrarlanan kan örneklemesi için en yaygın yöntem olmasına rağmen, anestezi ilaçlarından etkilenebilir ve kuyruk damarının küçük boyutu nedeniyle, tek bir örnekte toplanabilecek kan miktarı sınırlıdır ve bu da daha uzun bir kan alma süresine yol açar 4,5. Sıçan kuyruğu damarlarının kılcal mikrosampasyonu (CMS) ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) -tandem kütle …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Lanzhou Üniversitesi İkinci Hastanesi’nin Cuiying Plan Projesi tarafından desteklenmiştir (Hibe No. PR0121015) ve Gansu İl Üriner Sistem Hastalıkları Araştırma Anahtar Laboratuvarı (Hibe No. 0412D2).
Materials
| 0.75% normal saline | Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | —— | Prepared heparin sodium solution |
| 1 mL Pasteur pipette | Biosharp | BS-XG-01-NS | Blood collection |
| 1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm) | Shinva Medical Instrument Co.,Ltd. | 0.45*12RWLB | Blood collection |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Biosharp | BS-15-M | Blood storage and collection |
| 75% medical alcohol | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | —— | Disinfection of rat blood collection site |
| Centrifuge tube holder | Biosharp | BS-05/15-SM60 | —— |
| Electronic scale | Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd. | JE1002 | Weigh |
| Heparin sodium injection | Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. | —— | Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL |
| Low temperature centrifuge | HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument Co., Ltd. | H1750R | Separation of serum |
References
- . Blood collection: The rat IACUC Guideline Available from: https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf (2022)
- Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (10), 599-609 (2020).
- Liu, X., et al. Modified blood collection from tail veins of non-anesthetized mice with a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier. Journal of Visualized Experiments. (144), e65513 (2019).
- Zou, W., et al. Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system. Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).
- Charlès, L., et al. Modified tail vein and penile vein puncture for blood sampling in the rat model. Journal of Visualized Experiments. (196), e65513 (2023).
- Wang, L., et al. Repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat. Journal of Visualized Experiments. (180), e63439 (2022).
- Yang, H., et al. Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats. Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).
- Tochitani, T., et al. Effects of microsampling on toxicity assessment of hematotoxic compounds in a general toxicity study in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 47 (7), 269-276 (2022).
- Harikrishnan, V. S., Hansen, A. K., Abelson, K. S., Sørensen, D. B. A comparison of various methods of blood sampling in mice and rats: Effects on animal welfare. Laboratory Animals. 52 (3), 253-264 (2018).
- Yokoyama, H., et al. Lack of toxicological influences by microsampling (50 µL) from jugular vein of rats in a collaborative 28-day study. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (6), 319-325 (2020).
- Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
- Lu, W., et al. Microsurgical skills of establishing permanent jugular vein cannulation in rats for serial blood sampling of orally administered drug. Journal of Visualized Experiments. (178), e63167 (2021).
- National Research Council of the National Academies, Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. . Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).
- Perciedu Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. The Journal of Physiology. 598 (18), 3793-3801 (2020).
- Charan, J., Kantharia, N. D. How to calculate sample size in animal studies. Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).
- Turner, P. V., Pang, D. S., Lofgren, J. L. A review of pain assessment methods in laboratory rodents. Comparative Medicine. 69 (6), 451-467 (2019).
- Kurata, M., Misawa, K., Noguchi, N., Kasuga, Y., Matsumoto, K. Effect of blood collection imitating toxicokinetic study on rat hematological parameters. The Journal of Toxicological Sciences. 22 (3), 231-238 (1997).
- Zeller, W., Weber, H., Panoussis, B., Bürge, T., Bergmann, R. Refinement of blood sampling from the sublingual vein of rats. Laboratory Animals. 32 (4), 369-376 (1998).
