Obtention de cryosections de haute qualité d’œil de lapin entier

Erik  A. Souverein; Aaron Nagiel; Ksenia Gnedeva

doi:10.3791/66115

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Article de méthode

Obtention de cryosections de haute qualité d’œil de lapin entier

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DOI :

10.3791/66115

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10 novembre 2023

Erik A. Souverein¹ , Aaron Nagiel²^,³^,⁴ , Ksenia Gnedeva⁵^,⁶

¹Keck School of Medicine, University of Southern California, ²The Vision Center, Department of Surgery, Children’s Hospital Los Angeles, ³The Saban Research Institute, Children’s Hospital Los Angeles, ⁴USC Roski Eye Institute, Department of Ophthalmology, Keck School of Medicine, University of Southern California, ⁵Eli and Edythe Broad CIRM Center for Regenerative Medicine and Stem Cell Research, University of Southern California, ⁶Tina and Rick Caruso Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, University of Southern California

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une méthode fiable pour obtenir des cryosections de haute qualité d’yeux de lapin entiers. Il détaille les procédures de dissection, de fixation, d’intégration et de sectionnement de l’œil de lapin, qui peuvent être facilement adaptées pour être utilisées dans toute étude utilisant l’immunohistochimie dans des yeux plus grands.

Résumé

Ce protocole décrit comment obtenir des cryosections rétiniennes de haute qualité chez des animaux de grande taille, tels que les lapins. Après l’énucléation, l’œil est brièvement immergé dans le fixateur. Ensuite, la cornée et l’iris sont retirés et l’œil est laissé toute la nuit pour une fixation supplémentaire à 4 °C. Après la fixation, l’objectif est retiré. L’œil est ensuite placé dans un cryomoule et rempli d’un milieu d’enrobage. En retirant le cristallin, le milieu d’enrobage a un meilleur accès au vitré et conduit à une meilleure stabilité rétinienne. Il est important que l’œil soit incubé dans un milieu d’enrobage pendant la nuit pour permettre une infiltration complète dans tout le vitré. Après une nuit d’incubation, l’œil est congelé sur de la glace sèche et sectionné. Des coupes rétiniennes entières peuvent être obtenues pour une utilisation en immunohistochimie. Des protocoles de coloration standard peuvent être utilisés pour étudier la localisation des antigènes dans le tissu rétinien. Le respect de ce protocole permet d’obtenir des cryosections rétiniennes de haute qualité qui peuvent être utilisées dans toute expérience utilisant l’immunohistochimie.

Introduction

La rétine est composée de plusieurs couches de cellules spécialisées dans l’œil qui, ensemble, convertissent la lumière en signaux neuronaux. Parce que la rétine joue un rôle essentiel dans la vision, la compréhension de sa structure et de sa fonction peut fournir des informations précieuses sur certaines des causes les plus courantes de perte de vision, telles que la dégénérescence maculaire et la rétinopathie diabétique, entre autres.

Les lapins servent de modèle animal pratique dans la recherche rétinienne car ils offrent plusieurs avantages par rapport aux autres modèles. L’anatomie des yeux de lapin est relativement similaire à celle d....