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Article de méthode

Induction de l’AVC ischémique aigu chez la souris à l’aide de la technique d’occlusion de l’artère moyenne distale

3.8K vues

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DOI :

10.3791/66134

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15 décembre 2023

 ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour établir un modèle distal d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (dMCAO) par électrocoagulation transcrânienne chez les souris C57BL/6J et évaluons le comportement neurologique et les caractéristiques histopathologiques ultérieurs.

Résumé

L’AVC ischémique reste la principale cause de mortalité et de déficience fonctionnelle parmi les populations adultes à l’échelle mondiale. Seule une minorité de patients victimes d’un AVC ischémique sont éligibles pour recevoir une thrombolyse intravasculaire ou une thrombectomie mécanique dans la fenêtre de temps optimale. Parmi ces survivants d’AVC, environ deux tiers souffrent de dysfonctionnements neurologiques sur une période prolongée. L’établissement d’un modèle expérimental stable et reproductible de l’AVC ischémique est extrêmement important pour approfondir l’étude des mécanismes physiopathologiques et développer des stratégies thérapeutiques efficaces pour l’AVC ischémique. L’artère cérébrale moyenne (ACM) représente l’emplacement prédominant de l’AVC ischémique chez l’homme, l’occlusion de l’ACM servant de modèle fréquemment utilisé de l’ischémie cérébrale focale. Dans ce protocole, nous décrivons la méthodologie d’établissement du modèle d’occlusion distale de MCA (dMCAO) par électrocoagulation transcrânienne chez les souris C57BL/6. Étant donné que le site d’occlusion est situé au niveau de la branche corticale de l’ACM, ce modèle génère une lésion infarctus modérée limitée au cortex. La caractérisation neurologique, comportementale et histopathologique a mis en évidence un dysfonctionnement moteur visible, une dégénérescence neuronale et une activation prononcée de la microglie et des astrocytes dans ce modèle. Ainsi, ce modèle de souris dMCAO fournit un outil précieux pour étudier l’ischémie, l’AVC et la valeur de la popularisation.

Introduction

L’accident vasculaire cérébral est une maladie cérébrovasculaire aiguë fréquente caractérisée par une incidence élevée d’invalidité et de mortalité1. Sur l’ensemble des cas d’AVC, près de 80 % appartiennent à l’AVC ischémique2. Jusqu’à présent, la thrombolyse intraveineuse reste l’une des rares approches productives pour le traitement de l’AVC ischémique aigu. Cependant, l’efficacité du traitement thrombolytique est limitée par la fenêtre temporelle efficace étroite et la survenue d’une transformation hémorragique3. Dans la phase de rééducation à long terme après un AVC ischémique, un nombre consi....

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Protocole

Le protocole expérimental a été approuvé par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de l’Université de Jianghan et a été mené conformément aux directives éthiques sur les animaux de laboratoire publiées par le Centre de contrôle des maladies de Chine. Des souris C57BL/6J mâles adultes, âgées de 10 semaines, pesant de 24 à 26 g, ont été utilisées dans ce protocole. Toutes les souris ont été logées dans un environnement contrôlé par un cycle lumière/obscurité de 12 heures avec de la nourriture et de l’eau à volonté.

1. Préparation préopératoire

REMARQUE : Les principau....

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Résultats

Les principaux instruments utilisés pour effectuer le dMCAO sont l’ensemble d’instruments microchirurgicaux, le vaporisateur d’isoflurane et le générateur d’électrocoagulation microchirurgicale monopolaire illustré à la figure 1. La procédure expérimentale de cette étude est illustrée à la figure 2. En bref, une petite craniotomie osseuse a été utilisée pour exposer le MCA distal, qui a ensuite été coagulé pour induire une ischémie cérébrale focale permanente ch.......

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Discussion

Dans le protocole actuel du modèle dMCAO d’électrocoagulation par craniotomie, les interventions chirurgicales sont menées avec un minimum d’invasivité, dans lequel seule une partie du muscle temporal est séparée pour atténuer les effets indésirables sur la fonction masticatoire. Les souris se sont toutes bien rétablies après la procédure, sans qu’aucun cas de difficultés d’alimentation n’ait été observé. L’ACM peut être facilement discernée dans l’os temporal de la souris, facilitant ainsi l’identification précise des e.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont pas d’intérêts conflictuels à divulguer.

Remerciements

Cette étude a été soutenue par les subventions de la Nature Science Foundation de la province du Hubei (2022CFC057).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium
(TTC)
Sigma-Aldrich108380Colorant pour coloration TTC
Plaque de culture à 24 puitsCorning (États-Unis)CLS3527Récipient pour coloration TTC
4 % paraformaldéhydeWuhan Servicebio Technology
Co., Ltd.
G1101Fixation tissulaire
5 % d’albumine sérique bovineWuhan BOSTER Bio Co., Ltd.AR004Blocage d’antigène non spécifique
5-0 Suture à l’acide polyglycoliqueJinhuan Medical Co., LtdKCR531Matériau pour la chirurgie
Appareil d’anesthésieMidmark CorporationVMRAnimal anesthésié
Support de montage AntifadeBeyotime BiotechP0131Joint pour coloration IF
Automatisation-déshydratation des tissus  ;
machine
Leica Biosystems (Allemagne)TP1020Tissu déshydraté
Crème dépilatoireVeet (France)20220328Matériel pour chirurgie
Diclofénac  ; sodium  ; gelWuhan Ma Yinglong Pharmaceutical
  ;Co., Ltd.
H10950214Analgésie pour animaux
Pointe de forage (0,8 mm)Rwd Life Science Co., Ltd.Équipement pour la chirurgie
Solution de coloration à l’éosineWuhan Servicebio Technology
Co., Ltd.
G1001Colorant pour H& E coloration
Pommade oculaireGuangzhou Pharmaceutical Co., LtdH44023098Matériau pour la chirurgie
Microscope à fluorescenceOlympus (Japon)BX51Acquisition d’images
GFAP Anticorps monoclonal de souris CellSignaling Technology Inc.
(Danvers, MA, USA)
3670Anticorps primaire pour la coloration IF
Chèvre anti-souris Alexa
488-conjugué IgG
Cell Signaling Technology Inc.
(Danvers, MA, États-Unis)
4408Deuxième anticorps pour la coloration IF
Chèvre anti-lapin Alexa
594-conjugué IgG
Cell Signaling Technology Inc.
(Danvers, MA, USA)
8889Deuxième anticorps pour coloration IF
Appareil de mesure de la force de préhensionShanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.XR501Équipement pour test comportemental
Solution de coloration à l’hématoxylineWuhan Servicebio Technology
Co., Ltd.
G1004Colorant pour H& E coloration
Iba1 Anticorps monoclonal de lapinAbcamab178846Anticorps primaire pour la coloration IF
IsofluraneRwd Life Science Co., Ltd.R510-22-10Débitmètre sanguin Doppler laser animal anesthésié
Moor Instruments (UK)moorVMS Surveillance dudébit sanguin
MeloxicamBoehringer-IngelheimJ20160020Analgésie pour animaux
MicrodrillRwd Life Science Co., Ltd.78001Matériel chirurgical
Set d’instruments microchirurgicauxRwd Life Science Co., Ltd.SP0009-RÉquipement pour la chirurgie
MicrotomeThermo Fisher Scientific (USA)HM325Production de coupes de tissus
Lame de microtomeLeica Biosystems (Allemagne)819Production de coupes de tissus
Générateur d’électrocoagulation monopolaireSpring Scenery Medical Instrument
Co., Ltd.
CZ0001Équipement pour la chirurgie
Pommade à la mupirocineTianjin Smith Kline & Laboratoires < français > LtéeH10930064anti-infectieux pour lapin NeuN animal
Cell Signaling Technology Inc.
(Danvers, MA, USA)
24307Anticorps primaire pour la coloration IF
Neutre baumeAbsin Bioscienceabs9177Sceau pour H& E coloration Centre d’enrobage
paraffineThermo Fisher Scientific (USA)EC 350Produire des blocs de paraffine
Pentobarbital sodiqueSigma-AldrichP3761Animal euthanasié
Saline tamponnée au phosphateShanghai Beyotime Biotech Co., LtdC0221ARinçage pour section
de tissu RasoirShenzhen Codos Electrical Appliances
Co.,Ltd.
CP-9200Équipement pour la chirurgie
Solution de citrate de sodiumShanghai Beyotime Biotech Co., Ltd.P0083Récupération d’antigène pour la coloration IF
Anticorps monoclonal de

Références

  1. Patel, P., Yavagal, D., Khandelwal, P. Hyperacute management of ischemic strokes: JACC Focus Seminar. J Am Coll Cardiol. 75 (15), 1844-1856 (2020).
  2. GBD 2016 Stroke Collaborators. Global, regional, and national burde....

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Réimpressions et autorisations

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