Gavage-strategie voor afkookselformule van traditionele Chinese geneeskunde bij osteosarcoommodelmuizen
Summary
Het protocol biedt een gedetailleerd standaardisatieproces van afkookselformule en sondetechniek met Yiqi Jiedu-afkooksel in het osteosarcoommuismodel als voorbeeld. Het beschrijft de bescherming van dieren en verbetert de betrouwbaarheid van onderzoeksgegevens, en biedt effectieve strategieën voor het onderzoeken van therapeutische werkzaamheid en moleculaire mechanismen van afkookselformules in vivo.
Abstract
Afkookselformule is de meest gebruikte doseringsvorm in de traditionele Chinese geneeskunde en wordt al duizenden jaren in de klinische praktijk toegepast door transorale toediening, die wordt gekenmerkt door een snel effect, gemakkelijke absorptie en geïndividualiseerde behandeling op basis van de specifieke syndromen van patiënten. De kwaliteit van de afkookformule is direct verantwoordelijk voor de klinische werkzaamheid van de traditionele Chinese geneeskunde; Daarom is het standaardisatieproces van de afkookformule belangrijk om verschillen in afkookselkwaliteit veroorzaakt door subjectieve factoren te voorkomen. Ondertussen, vanwege de beperkingen van het uitvoeren van klinische experimenten, worden kleine dieren met menselijke ziekten, zoals muizen, vaak gebruikt in medisch onderzoek om de therapeutische werkzaamheid en uitgebreide mechanismen van verschillende interventies te onderzoeken, waaronder de afkookformule voor traditionele Chinese geneeskunde. Bijgevolg is de bekwame maagsondetechniek, als een belangrijke transorale toedieningsmethode, bijzonder belangrijk om mogelijke schade aan de slokdarm en het morsen van geneesmiddelen te voorkomen, wat ervoor zorgt dat aan elk modeldier een gelijke hoeveelheid geneesmiddel wordt toegediend, wat leidt tot nauwkeurige experimentele resultaten. Bovendien zijn de gestandaardiseerde methode voor de bereiding van afkookselformules en de bekwame maagsondestrategie noodzakelijk om het dierenwelzijn te beschermen en het aantal gebruikte dieren te minimaliseren. Hier rapporteerden we een gedetailleerd standaardisatieproces van de afkookformule en gavage-techniek met Yiqi Jiedu-afkooksel in osteosarcoommuismodel als voorbeeld. De werkzaamheid werd geëvalueerd aan de hand van het tumorvolume. Dit protocol zal de bescherming van dieren maximaliseren en de betrouwbaarheid van onderzoeksgegevens verbeteren, waardoor effectieve strategieën worden geboden voor toekomstig onderzoek naar therapeutische werkzaamheid en moleculaire mechanismen van afkookselformule voor traditionele Chinese geneeskunde in vivo.
Introduction
Afkookselformule is de meest gebruikte doseringsvorm van de traditionele Chinese geneeskunde en de vloeibare geneesmiddelen 1,2. De afkookselformule van de traditionele Chinese geneeskunde wordt verwerkt door de kruiden na weken in water af te koken, gevolgd door filtering om het bezinksel weg te gooien.
Omdat de afkookformule kan worden geïndividualiseerd op basis van klinische behoeften, vooral in overeenstemming met de kenmerken van evidence-based behandeling in de traditionele Chinese geneeskunde, wordt deze toedieningsvorm via transorale toediening al duizenden jaren in de klinische praktijk toegepast met specifieke en onvervangbare voordelen 3,4. De kwaliteit van de afkookformule is direct gerelateerd aan de klinische werkzaamheid. Daarom moet de afkookformule worden bereid op basis van de principes voor de gestandaardiseerde afkookmethoden om ervoor te zorgen dat de actieve ingrediënten maximaal worden geëxtraheerd en beschermd3. Ondertussen zijn afkookselklare medicijnen de belangrijkste vorm van rauwe Chinese kruiden die in de klinische praktijk worden gebruikt; de kwaliteitsnormen en productiemethoden van geneesmiddelen die klaar zijn voor afkooksel moeten voldoen aan de bepalingen van de Chinese Farmacopee2. Bovendien moeten de voorgeschreven afkookselklare medicijnen ten minste 30 minuten in koud drinkwater worden geweekt voordat ze in een speciale farmaceutische pot worden afkooksel door verhitting5. Studies hebben aangetoond dat de meeste actieve ingrediënten kunnen worden geëxtraheerd door twee keer een afkooksel te gebruiken, en de praktijkcode voor de toediening van afkookkamers van traditionele Chinese medicijnen in medische instellingen schrijft ook voor dat afkooksel twee keer moet worden gedaan 4,6,7. Als speciale Chinese kruiden, zoals een met een harde textuur of tonics, worden voorgeschreven, wordt aanbevolen om de afkooktijd te verlengen. Het afkookgerei en de opslagcontainers die direct in contact komen met de afkookformule, te beginnen met de container waarin de voorgeschreven afkookselklare medicijnen zijn gedrenkt, moeten chemisch stabiel zijn en deksels hebben, zoals stoofschotels, keramiek, glas en roestvrij staal. Aluminium en gewone plastic producten mogen echter niet worden gebruikt, terwijl ijzer en ander bijtend keukengerei moeten worden verboden om mogelijke chemische reacties te voorkomen, die de therapeutische werkzaamheid verminderen en zelfs schadelijke effecten veroorzaken 4,6,7.
Vanwege de beperkingen van het uitvoeren van klinische experimenten, worden kleine dieren die de menselijke ziekten dragen, zoals muizen, vaak gebruikt in medisch onderzoek om de therapeutische werkzaamheid en uitgebreide mechanismen van verschillende interventies te onderzoeken, waaronder de afkookformule van de traditionele Chinese geneeskunde 8,9; In tegenstelling tot mensen moeten de afkookselformules echter elke dag worden bereid, met elkaar worden gemengd en in de klinische praktijk 2x per dag vers worden toegediend. Dieren zijn niet in staat om vrijwillig hun medicijnen op tijd in te nemen met de vereiste dosering, en de meeste dierproeven met betrekking tot de traditionele Chinese geneeskunde zijn momenteel op maagsonde gebaseerde orale toediening van de afkookselformules. De afkooksels die voor in-vivodierproeven worden gebruikt, moeten van tevoren worden bereid, gealiquoteerd, bij -20 °C worden bewaard en vlak voor gebruik worden ontdooid 3,4,10. Bovendien verhogen ondermaatse immobilisatie van dieren en manipulatie van sondenaalden het risico op onnodige verwondingen en negatieve emoties. Daarom is de bekwame maagsondetechniek, als een belangrijke methode voor transorale toediening van geneesmiddelen, bijzonder belangrijk om mogelijk slokdarmletsel en morsen van geneesmiddelen te voorkomen, en er zo voor te zorgen dat elk modeldier een gelijke hoeveelheid voorgeschreven kruidengeneesmiddelen krijgt om nauwkeurige experimentele resultaten te bereiken. Hier bieden we een maagsondeprotocol voor de afkookformule van de traditionele Chinese geneeskunde.
Protocol
Representative Results
Discussion
De klinische werkzaamheid van de voorgeschreven kruiden in de traditionele Chinese geneeskunde hangt grotendeels samen met de toegediende dosis en doseringsvorm; Daarom zijn de vaststelling van een gestandaardiseerde afkookstrategie en een bekwaam toedieningsproces noodzakelijk in de klinische praktijk, evenals bij het verbeteren van de betrouwbaarheid van experimentele resultaten.
In deze studie hebben we eerst een gedetailleerde strategie gegeven voor het gestandaardiseerde afkooksel van Chi…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Het huidige werk wordt ondersteund door subsidies van de (1) National Nature Science Foundation (81973877 en 82174408), (2) National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) Shanghai Top Priority Research Center bouwproject (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation, en (5) onderzoeksprojecten binnen het budget van Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
References
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK – PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- . Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005)
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072 (2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93 (2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).
