Gavage Strategi for Decoction Formel av tradisjonell kinesisk medisin i Osteosarcoma Model Mus
Summary
Protokollen gir en detaljert standardiseringsprosess av avkoksformel og gavageteknikk med Yiqi Jiedu-avkok i osteosarkommusemodellen som et eksempel. Den beskriver dyrevern og forbedrer påliteligheten av forskningsdata, og gir effektive strategier for å undersøke terapeutisk effekt og molekylære mekanismer for avkokformler in vivo.
Abstract
Avkoksformel er den mest brukte doseringsformen i tradisjonell kinesisk medisin og anvendt i klinisk praksis i tusenvis av år ved transoral administrering, som er preget av rask effekt, enkel absorpsjon og individualisert behandling basert på pasientens spesifikke syndromer. Kvaliteten på avkokformelen er direkte ansvarlig for den kliniske effekten av tradisjonell kinesisk medisin; Derfor er standardiseringsprosessen av avkokformelen viktig for å unngå forskjeller i avkokkvalitet forårsaket av subjektive faktorer. I mellomtiden, på grunn av begrensningene ved å utføre kliniske eksperimenter, brukes små dyr som bærer menneskelige sykdommer, som mus, ofte i medisinsk forskning for å utforske terapeutisk effekt og omfattende mekanismer for ulike inngrep, inkludert avkokformelen for tradisjonell kinesisk medisin. Følgelig, som en viktig transoral administrasjonsmetode, er den dyktige gavage-teknikken spesielt viktig for å unngå potensiell spiserørskade og legemiddelsøl, noe som vil sikre at like mye medisin administreres til hvert modelldyr, noe som fører til nøyaktige eksperimentelle resultater. Videre er den standardiserte metoden for avkoksformelforberedelse og dyktig gavage-strategi nødvendig for å beskytte dyrevelferden og minimere antall dyr som brukes. Her rapporterte vi en detaljert standardiseringsprosess av avkokformelen og gavageteknikken med Yiqi Jiedu-avkok i osteosarkommusemodell som et eksempel. Effekten ble evaluert av tumorvolumet. Denne protokollen vil maksimere dyrevern og forbedre påliteligheten av forskningsdata, og gir derfor effektive strategier for fremtidig undersøkelse av terapeutisk effekt og molekylære mekanismer for avkoksformel for tradisjonell kinesisk medisin in vivo.
Introduction
Dekoksjonsformel er den mest brukte doseringsformen av tradisjonell kinesisk medisin og flytende legemidler 1,2. Avkokformelen for tradisjonell kinesisk medisin behandles ved å avkok urter i vann etter å ha blitt gjennomvåt, etterfulgt av filtrering for å kaste bort dregs.
Fordi avkokformelen kan individualiseres basert på kliniske nødvendigheter, spesielt i tråd med egenskapene til evidensbasert behandling i tradisjonell kinesisk medisin, har denne doseringsformen via transoral administrasjon blitt brukt i klinisk praksis i tusenvis av år med spesifikke og uerstattelige fordeler 3,4. Kvaliteten på avkokformelen er direkte relatert til den kliniske effekten. Derfor må avkokformelen fremstilles basert på prinsippene for de standardiserte avkokningsmetodene for å sikre at de aktive ingrediensene maksimalt ekstraheres og beskyttes3. I mellomtiden er avkok-klare medisiner den viktigste formen for rå kinesiske urter som brukes i klinisk praksis; kvalitetsstandardene og produksjonsmetodene for foreskrevne avkokingsklare medisiner må overholde bestemmelsene i den kinesiske farmakopéen2. Videre må de foreskrevne avkokklare medisinene bløtlegges i kaldt drikkevann i minst 30 minutter før de avkokes i en spesiell farmasøytisk gryte ved oppvarming5. Studier har vist at de fleste av de aktive ingrediensene kan ekstraheres ved avkok i to ganger, og anbefalingen for administrasjon av avkok av tradisjonelle kinesiske medisiner i medisinske institusjoner foreskriver også avkok som skal gjøres to ganger 4,6,7. Hvis spesielle kinesiske urter, som en med hard tekstur eller tonics, foreskrives, anbefales avkokningstiden å forlenges. Avkokredskapene og oppbevaringsbeholderne som direkte kommer i kontakt med avkokformelen, fra beholderen der de foreskrevne avkok-klare medisinene er gjennomvåt, skal være kjemisk stabile og ha lokk, for eksempel gryteretter, keramikk, glass og rustfritt stål. Imidlertid bør aluminium og vanlige plastprodukter ikke brukes, mens jern og andre etsende redskaper bør forbys for å unngå mulige kjemiske reaksjoner, noe som vil redusere terapeutisk effekt og til og med gi skadelige effekter 4,6,7.
På grunn av begrensningene ved å utføre kliniske eksperimenter, brukes små dyr som bærer menneskelige sykdommer, som mus, ofte i medisinsk forskning for å utforske terapeutisk effekt og omfattende mekanismer for forskjellige inngrep, inkludert avkokformelen for tradisjonell kinesisk medisin 8,9; Imidlertid, i motsetning til mennesker, bør avkokformlene tilberedes hver dag, blandes sammen og nyadministreres 2x om dagen i klinisk praksis. Dyr er ikke i stand til frivillig å ta medisinene sine i tide med den nødvendige doseringen, og de fleste dyreforsøk relatert til tradisjonell kinesisk medisin er gavage-basert oral administrering av avkokformlene for tiden. Avkokformlene som brukes til in vivo dyreforsøk skal tilberedes på forhånd, alisiteres, oppbevares ved -20 °C og tines rett før bruk 3,4,10. Videre øker substandard dyr immobilisering og gavage nål manipulasjon risikoen for unødvendige skader og negative følelser. Derfor, som en viktig metode for transoral legemiddellevering, er den dyktige gavage-teknikken spesielt viktig for å unngå mulig esophageal skade og narkotikaspill, og dermed sikre at hvert modelldyr får like mye foreskrevet urtemedisin for å oppnå nøyaktige eksperimentelle resultater. Her gir vi en gavage-protokoll for avkokformelen for tradisjonell kinesisk medisin.
Protocol
Representative Results
Discussion
Den kliniske effekten av de foreskrevne urter i tradisjonell kinesisk medisin er i stor grad forbundet med administrert dose og doseringsform; Derfor er etablering av en standardisert avkokstrategi og en dyktig administrasjonsprosess nødvendig i klinisk praksis, samt for å forbedre påliteligheten av eksperimentelle resultater.
I denne studien ga vi først en detaljert strategi for standardisert avkok av kinesiske urter som brukes i klinisk praksis av tradisjonell kinesisk medisin, noe som l…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Det nåværende arbeidet støttes av tilskudd fra (1) National Nature Science Foundation (81973877 og 82174408), (2) National Key R &D Program of China (2020YFE0201600), (3) Shanghai Top Priority Research Center byggeprosjekt (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation, og (5) Forskningsprosjekter innenfor budsjettet til Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
References
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK – PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- . Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005)
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072 (2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93 (2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).
