Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Élevage de Delia antiqua axénique avec des aliments stériles semi-fermentés

1.4K vues

⸱

DOI :

10.3791/66259

⸱

22 décembre 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

Dans cet article

Résumé

Une procédure simple pour l’élevage de Delia antiqua axénique avec des aliments stériles semi-fermentés est décrite. Une seule souche de Wolbachia a été détectée dans chaque stade de D. antiqua axénique par PCR.

Résumé

Les insectes axéniques sont obtenus à partir de systèmes d’élevage artificiels stériles utilisant des milieux stériles. Ces insectes, caractérisés par leur petite taille, leur cycle de croissance court et leurs faibles besoins alimentaires, sont idéaux pour étudier la relation entre les micro-organismes et les hôtes. Le microbiote intestinal influence de manière significative les caractéristiques physiologiques des insectes hôtes, et l’introduction de souches spécifiques dans les insectes axéniques fournit une méthode pour vérifier les fonctions microbiennes intestinales. Delia antiqua, un ravageur menaçant de l’ordre des Diptères, de la famille des Anthomyiidae et du genre Delia, se nourrit principalement d’oignons, d’ail, de poireaux et d’autres légumes de la famille des Liliacées. Ses larves se nourrissent des bulbes, provoquant la pourriture, le flétrissement et même la mort de plantes entières. L’élevage de larves axéniques permet d’effectuer des études de suivi afin d’observer les effets de la microflore intestinale sur la croissance et le développement de D. antiqua. Contrairement à la méthode d’élimination des microbes associés par des antibiotiques, cet article présente une approche peu coûteuse et très efficace pour élever D. antiqua axénique. Après la stérilisation superficielle des œufs de D. antiqua , des aliments stériles semi-fermentés ont été utilisés pour élever les larves, et l’état axénique de D. antiqua a été vérifié par des essais dépendants et indépendants de la culture. En conclusion, la combinaison de la stérilisation des œufs d’insectes et de la préparation d’aliments stériles pour la culture larvaire a permis le développement d’une méthode efficace et simple d’obtention de D. antiqua axénique. Cette méthode fournit une approche puissante pour étudier les interactions entre les insectes et la microflore.

Introduction

Les animaux axéniques, définis comme des animaux chez lesquels aucun micro-organisme ou parasite viable ne peut être détecté, sont des modèles expérimentaux précieux pour étudier les interactions hôte-micro-organisme 1,2. Les insectes, le plus grand groupe d’invertébrés, peuvent former des relations symbiotiques avec des micro-organismes3. Les insectes axéniques peuvent être utilisés pour étudier les interactions hôte-symbiote dans les systèmes symbiotiques4. Par exemple, Nishide et al.5 ont mis au point une procédure pratique d’élevage st....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

D. antiqua sont obtenus dans le champ de Fanzhen, Taian.

1. Préparation d’aliments stériles

  1. Décollez les couches extérieures des oignons verts et jetez les feuilles vertes. Conservez la partie blanche des oignons verts (figure 1A) et lavez-les à l’eau stérile, en répétant le processus de rinçage trois fois. Coupez la partie blanche des oignons verts en dés de 1 à 2 cm à l’aide de ciseaux (voir tableau des matériaux) stérilisés avec une solution d’EtOH à 75 % (mentionnée à l’étape 2.5) pour une utilisation ultérieure.
  2. Pesez 50 g d’oignons verts coupé....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Les stades de développement du D. antiqua sont illustrés à la figure 4. Le cycle de vie complet comprend les œufs, les larves, les pupes (figure 4C) et les adultes (figure 4D). Ils sont cultivés dans des tubes à centrifuger stériles, et leur apparence et leur taux de survie sont impossibles à distinguer de ceux de D. antiqua élevés dans des conditions non axéniques. Les temps de croissance et de développement de ch.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

Les insectes possèdent un microbiote intestinal très complexe20,21, ce qui nécessite l’utilisation d’insectes axéniques inoculés avec des souches microbiennes intestinales spécifiques pour étudier les interactions insectes-microorganismes. La préparation d’insectes axéniques est cruciale pour de tels efforts de recherche. Le traitement antibiotique est une méthode utilisée pour éliminer le microbiote intestinal. Par exemple, Jung et Kim,22.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.

Remerciements

Ces travaux ont été soutenus par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (32272530), le projet New Twenty Policies for University in Jinan (2021GXRC040), les grands projets d’innovation scientifique et technologique dans la province du Shandong (2021TZXD002) et le projet d’intégration de la science et de l’éducation de l’Université de technologie de Qilu (2022PYI009, 2022PY016, 2022PT105).

....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
0,22 &mu ; Flacon filtrant MThermo Scientific450-0045
0.22 &mu ; M Seringue FiltreBiosharpBS-QT-011
Tamis 100 maillesZhejiang Shangyu Jinding Standard Sieve FactoryNon Numéros
1x solution PBSSolarbioP1020
2x Taq PCR Master MixGENVIEWGR1113-1ML
5.2 % NaClO solutionSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
Fiole conique de 500 mLThermo Scientific4103-0500
Tube à centrifuger ventilé de 50 mLJET BIOFILBRT-011-050
50x tampon TAEGENVIEWGT1307
Poudre de géloseDing GuoDH010-1.1
Incubateur biochimiqueSTIK21040121500010
Tamis à cellulesSAINING5022200
Chlorure de cholineSangon BiotechA600299-0100
ddH2ODing GuoPER018-2
Pilon de broyage jetableJET BIOFILCSP-003-002
Kit d’extraction d’ADNSangon BiotechB518221-0050
Marqueur d’ADNSangon BiotechB600335-0250
Absolu d’éthanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
Papier filtreNEWSTAR1087309025
Robot culinaireGuangdong Midea Life Electric Appliance Manufacturing Co., Ltd.
incubateur Illuminated  ;Shanghai ESTABLISH Instrumentation Co., Ltd.
Acide L-ascorbiqueSangon BiotechA610021-0100
Épandeur en LSAINING6040000
Gélose nutritiveHope BioHB0109
CiseauxBing Yu  ; BY-103Achat sur l’incubateur Jingdong
ShockShanghai Zhichu Instrument Co., Ltd.
SucroseGENVIEWCS326-500G
Colorant d’acide nucléique Super GreenBiosharpBS355A
Table super-propreHeal ForceAC130052
TSBHope BioHB4114
Pompe à videZhejiang Taizhou Seeking Precision Vacuum Pump Co., Ltd.
Extrait de levureThermo ScientificLP0021B
de catalogue8001042810009218WBL25B26A16110768202000001422051031

Références

  1. Al-Asmakh, M., Zadjali, F. Use of germ-free animal models in microbiota-related research. Journal of Microbiology and Biotechnology. 25 (10), 1583-1588 (2015).
  2. Bhattarai, Y., Kashyap, P. C. Germ-free mice model for studying host-microbial interaction....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Explorer plus d’articles

Insectes axéniquesécologie microbiennemicrobiote intestinalstérilisation d'œufs d'insectesélevage larvairemicroflore intestinaleessais dépendants de la cultureélevage sans antibiotiques