Techniques d’échantillonnage rapide de six organes cruciaux chez le xénope adulte

Résumé

Cet article présente un guide pour l’échantillonnage de six organes significatifs et diversifiés chez le xénope adulte qui peuvent être rapidement et facilement accessibles : le ventricule cardiaque, le lobe du foie, le pancréas, les corps adipeux, les reins appariés et la peau.

Résumé

Le xénope est un puissant organisme modèle pour comprendre le développement et la maladie des vertébrés depuis plus de cent ans. Bien que les techniques d’analyse expérimentale et de dissection de l’embryon aient été bien documentées, les descriptions des structures et des organes du xénope adulte, ainsi que les techniques de travail avec les adultes, n’ont pas été mises à jour pour tenir compte des exigences des approches modernes telles que la protéomique quantitative et la transcriptomique unicellulaire. Les perspectives centrées sur le type de cellule et le gène nécessitent des observations contrastées dans les stades embryonnaires par rapport à celles des tissus adultes. Les organes de la larve subissent des changements importants dans leur structure globale, leur morphologie et leur emplacement anatomique tout au long de la transition larvaire-adulte, notamment lors d’un remodelage massif de la métamorphose. Il est essentiel d’établir des normes solides pour l’identification et la dissection des organes afin de garantir la cohérence des ensembles de données résultant d’études réalisées dans différents laboratoires. Le présent protocole identifie six des organes du xénope adulte, démontrant des méthodes de dissection et d’échantillonnage du ventricule cardiaque, du foie, du corps adipeux, du pancréas, des reins appariés et de la peau du xénope adulte. Selon les méthodes de conservation, les organes disséqués peuvent être utilisés pour la protéomique quantitative, la transcriptomique unicellulaire/noyaux, l’hybridation in situ , l’immunohistochimie, l’histologie, etc. Ce protocole vise à normaliser l’échantillonnage des tissus et à faciliter les investigations multi-laboratoires des systèmes d’organes adultes.

Introduction

Bien que la « dissection numérique » du xénope adulte soit disponible¹, l’échantillonnage reproductible d’organes et de tissus du xénope adulte reste difficile sans les instructions détaillées disponibles pour d’autres modèles adultes (par exemple, souris^{2, 3, 4}). Cet article vise à fournir des conseils clairs pour un échantillonnage précis et reproductible d’organes de xénope adultes, similaire à ce qui est actuellement disponible pour leurs larves⁵. L’accent est mis sur la facilité de réalisation afi....

Protocole

Toutes les expériences ont été réalisées conformément aux règles et règlements de l’IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee) de la Harvard Medical School (IS 00001365_3). Les résultats représentatifs sont présentés pour un mâle albinos mature perfusé et non perfusé, Xenopus laevis.

1. Préparation expérimentale

REMARQUE : Si le protocole^de perfusion 8 est suivi avant l’échantillonnage, passez à l’étape 2.2.

1. S’assurer que l’établissement de recherche a approuvé la technique d’euthanasie décrite dans le présent protocole.
2. Préparez une ....

Résultats

En utilisant les figures 1 à 20 et en suivant toutes les étapes de ce protocole, le ventricule cardiaque, le lobe gauche du foie, le pancréas, les corps adipeux gauches, les reins appariés et un lambeau de peau ont été proprement excisés dans l’heure qui a suivi l’euthanasie. Pendant ce temps, les échantillons sont rincés et parés de manière à ce qu’ils apparaissent, comme le montre la figure 21.

Discussion

Comme ce protocole vise à maximiser la fraîcheur, certains échantillons peuvent inclure des tissus indésirables. Par exemple, le canal hépatopancréatique et une partie du mésentère sont échantillonnés avec le pancréas, et certains tissus péritonéaux, glandes surrénales et uretères seront toujours échantillonnés avec les reins appariés.  Si la fraîcheur n’est pas un problème, un échantillonnage plus précis peut être obtenu à l’aide de techniques modifiées.

L’apparence et l’emplacement des organ.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
5x Loupe avec lumière LED et support	amazon.com	la	lumière B08QJ6J8P1 ne doit pas produire de chaleur
Pipettes de transfert jetables	VWR	414004-036
Dissection Pince à pointes fines	Fisher Scinetific	08-875
Ciseaux de dissection piont pointus, droit 6.5"	VWR	76457-374
Plateau de dissection	Fisher Scinetific	14-370-284	sont une alternative acceptable
Conteneur d’euthanasie	US Plastic  ;	Objet  ; 2860	contenants opaques alternatifs acceptables
Couvercle de récipient d’euthanasie	US Plastic  ;	Objet  ; 3047
Ciseaux d’iridectomie 6"	VWR	470018-938	ciseaux à iris sont une alternative acceptable
MS-222 : Syncaine (anciennement tricaïne)	Pentair AES	TRS1
PBS 1x	Corning	21-040-CV
Bicarbonate de sodium, poudre, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Pince à échantillons, VWR dentelé		82027-442
Goupilles en T pour la dissection Fisher	Scinetific	S99385

Les feuilles de polystyrène Les