चूहों से व्युत्पन्न Decellularized तिल्ली मैट्रिक्स का निर्माण
Summary
डिसेलुलराइज्ड प्लीहा मैट्रिक्स (डीएसएम) यकृत ऊतक इंजीनियरिंग के क्षेत्र में आशाजनक अनुप्रयोग रखता है। यह प्रोटोकॉल चूहे के डीएसएम को तैयार करने की प्रक्रिया की रूपरेखा तैयार करता है, जिसमें चूहे की तिल्ली की कटाई, छिड़काव के माध्यम से उन्हें विकोशियीकरण करना और इसकी विशेषताओं की पुष्टि करने के लिए परिणामी डीएसएम का मूल्यांकन करना शामिल है।
Abstract
लिवर प्रत्यारोपण अंतिम चरण के यकृत रोग के लिए प्राथमिक उपचार है। हालांकि, दाता अंगों की कमी और अपर्याप्त गुणवत्ता के लिए वैकल्पिक चिकित्सा के विकास की आवश्यकता होती है। डिसेल्युलराइज्ड लिवर मैट्रिक्स (डीएलएम) का उपयोग करने वाले बायोआर्टिफिशियल लिवर (बीएएल) आशाजनक समाधान के रूप में उभरे हैं। हालांकि, उपयुक्त डीएलएम की सोर्सिंग चुनौतीपूर्ण बनी हुई है। एक decellularized तिल्ली मैट्रिक्स (डीएसएम) के उपयोग बाल के लिए एक नींव के रूप में पता लगाया गया है, एक आसानी से उपलब्ध विकल्प की पेशकश. इस अध्ययन में, चूहे तिल्ली काटा और decellularization अभिकर्मकों के साथ फ्रीज पिघलना चक्र और छिड़काव का एक संयोजन का उपयोग decellularized थे. प्रोटोकॉल ने डीएसएम के भीतर बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) के माइक्रोस्ट्रक्चर और घटकों को संरक्षित किया। पूर्ण विसेलुलराइजेशन प्रक्रिया में लगभग 11 घंटे लगे, जिसके परिणामस्वरूप डीएसएम के भीतर एक बरकरार ईसीएम हुआ। हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण ने ईसीएम की संरचना और संरचना को बनाए रखते हुए सेलुलर घटकों को हटाने की पुष्टि की। प्रस्तुत प्रोटोकॉल डीएसएम प्राप्त करने के लिए एक व्यापक विधि प्रदान करता है, यकृत ऊतक इंजीनियरिंग और सेल थेरेपी में संभावित अनुप्रयोगों की पेशकश करता है। ये निष्कर्ष अंत-चरण यकृत रोग के उपचार के लिए वैकल्पिक दृष्टिकोण के विकास में योगदान करते हैं।
Introduction
जिगर प्रत्यारोपण अंत चरण जिगरकी बीमारी 1,2,3 के लिए केवल निश्चित उपचार बनी हुई है. हालांकि, दाता अंगों की महत्वपूर्ण कमी और घटती गुणवत्ता ने वैकल्पिक उपचार की आवश्यकता को बढ़ा दियाहै। पुनर्योजी चिकित्सा के क्षेत्र में, जैव कृत्रिम जिगर (बीएएल) decellularized जिगर मैट्रिक्स (डीएलएम) का उपयोग आशाजनक समाधान 5,6,7 के रूप में उभरा है. डीएलएम मूल यकृत संरचना को संरक्षित करता है, जिसमें इसके जटिल माइक्रोवास्कुलर नेटवर्क और ईसीएम के घटक शामिल हैं, जो प्रत्यारोपण योग्य बीएएल बनाने के लिए एक मचान की पेशकश करते हैं जो संभावित रूप से यकृत रोगों को कम कर सकते हैं।
वादे के बावजूद, इस तकनीक को अपनाने में चुनौतियों का सामना करना पड़ता है, विशेष रूप से उपयुक्त डीएलएम की सोर्सिंग में। मानव-व्युत्पन्न डीएलएम कम आपूर्ति में हैं, जबकि पशु स्रोतों से रोग संचरण और प्रतिरक्षा अस्वीकृति के जोखिम उठाते हैं। एक अभिनव दृष्टिकोण में, हमारे शोध ने बीएएल 8,9,10,11 के लिए एक नींव के रूप में एक विकोशियीकृत प्लीहा मैट्रिक्स (डीएसएम) के उपयोग का पता लगाया है। प्लीहा विभिन्न चिकित्सा स्थितियों में अधिक आसानी से उपलब्ध हैं, जैसे पोर्टल उच्च रक्तचाप, दर्दनाक टूटना, इडियोपैथिक थ्रोम्बोसाइटोपेनिक पुरपुरा, और हृदय मृत्यु के बाद दान। इसलिए, अनुसंधान उद्देश्यों के लिए यकृत की तुलना में प्लीहा अधिक व्यापक रूप से उपलब्ध हैं। जिन रोगियों में स्प्लेनेक्टोमी हुई है, वे गंभीर परिस्थितियों से पीड़ित नहीं होते हैं, आगे प्लीहा की अक्षमता की पुष्टि करते हैं। प्लीहा का माइक्रोएन्वायरमेंट, विशेष रूप से बाह्य मैट्रिक्स और साइनसोइड्स, यकृत के समान है। यह प्लीहा को हेपेटोसाइट प्रत्यारोपण अनुसंधान में सेल आसंजन और प्रसार के लिए एक उपयुक्त अंग बनाता है। इन निष्कर्षों के आधार पर, हमारी पिछली जांच से पता चला है कि डीएसएम डीएलएम के साथ तुलनीय माइक्रोस्ट्रक्चर और घटकों को साझा करते हैं और एल्ब्यूमिन और यूरिया उत्पादन सहित हेपेटोसाइट्स के अस्तित्व और कार्य का समर्थन कर सकते हैं। इसके अलावा, डीएसएम को अस्थि मज्जा मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं के यकृत भेदभाव को बढ़ाने के लिए दिखाया गया है, जिससे बेहतर और सुसंगत कार्यक्षमता हो सकती है।
हेपरिन के साथ इलाज डीएसएम को नियोजित करके, हमने कार्यात्मक बीएएल को इंजीनियर किया है जो प्रभावी अल्पकालिक एंटीकोआग्यूलेशन और आंशिक यकृत समारोह मुआवजा11 का प्रदर्शन करने में सक्षम है। नतीजतन, यह त्रि-आयामी डीएसएम यकृत ऊतक इंजीनियरिंग और सेल थेरेपी की उन्नति के लिए महत्वपूर्ण वादा करता है। इस काम में, हम चूहे की तिल्ली की कटाई और डीएसएम तैयार करने के विस्तृत तरीके प्रस्तुत करते हैं जो ईसीएम के माइक्रोस्ट्रक्चर और घटकों को संरक्षित करते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
बीएएल अंत-चरण यकृत रोग के उपचार के लिए एक प्रभावी दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करते हैं, विशेष रूप से उन मामलों में जहां यकृत प्रत्यारोपण दाता अंगों की वर्तमान कमी से बाधित होताहै 6. बीएएल बनाने क?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (82000624), शानक्सी के नेचुरल साइंस बेसिक रिसर्च प्रोग्राम (2022JQ-899 & 2021JM-268), शानक्सी प्रांत इनोवेशन कैपेबिलिटी सपोर्ट प्रोग्राम (2023KJXX-030), शानक्सी प्रांत कुंजी R&D प्लान यूनिवर्सिटी ज्वाइंट प्रोजेक्ट-की प्रोजेक्ट (2021GXLH-Z-047), शीआन जियाओतोंग विश्वविद्यालय के पहले संबद्ध अस्पताल का संस्थागत फाउंडेशन (2021HL-42 और 2021HL-21) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Anesthesia Machine | Harvard Apparatus | tabletop | animal anesthesia |
| bubble trap | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd. | pore diameter: 5 μm | prevent air bubbles |
| Buprenorphine | TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltd | an analgesic | |
| Hemostatic Forceps | Shanghai Medical Instruments Co., Ltd | J31020 | surgical tool |
| Heparinized Saline | SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD | prevent the formation of thrombosis | |
| Isoflurane | RWD life Science Co. | anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia | |
| Penicillin-Streptomycin | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | C0222 | antibiotics in vitro to prevent microbial contamination |
| Peristaltic Pump | Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd. | BT100-1L | |
| Phosphate-Buffered Saline | Shanghai Titan Scientific Co., Ltd. | 4481228 | phosphoric acid buffer salt solution |
| Silicone Tube | Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd. | 2.4×0.8mm | |
| Silk Suture | Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory | 6-0 and 3-0 | ligate blood vessels |
| Sodium Dodecyl Sulfate | Shanghai Titan Scientific Co., Ltd. | 151-21-3 | ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes |
| Syringe Pump | Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd | BeneFusion SP5 | intravenous infusion |
| Triton X-100 | Shanghai Titan Scientific Co., Ltd. | 9002-93-1 | non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions |
| Venous Catheter | B. Braun Company | 24G | inserting the spleen artery |
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