La matrice de rate décellularisée (DSM) a des applications prometteuses dans le domaine de l’ingénierie tissulaire hépatique. Ce protocole décrit la procédure de préparation du DSM chez le rat, qui comprend la récolte de rates de rats, leur décellularisation par perfusion et l’évaluation du DSM résultant pour confirmer ses caractéristiques.
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Article de méthode
Fabrication d’une matrice de rate décellularisée dérivée de rats
Dans cet article
Résumé
Résumé
La transplantation hépatique est le traitement principal de la maladie hépatique en phase terminale. Cependant, la pénurie et la qualité insuffisante des organes des donneurs nécessitent le développement de thérapies alternatives. Les foies bioartificiels (BAL) utilisant une matrice hépatique décellularisée (DLM) sont apparus comme des solutions prometteuses. Cependant, l’approvisionnement en DLM appropriés reste un défi. L’utilisation d’une matrice de rate décellularisée (DSM) a été explorée comme base pour les BAL, offrant une alternative facilement disponible. Dans cette étude, des rates de rat ont été prélevées et décellularisées à l’aide d’une combinaison de cycles de gel-dégel et de perfusion avec des réactifs de décellularisation. Le protocole a préservé les microstructures et les composants de la matrice extracellulaire (ECM) dans le DSM. Le processus complet de décellularisation a pris environ 11 h, ce qui a permis d’obtenir un ECM intact dans le DSM. L’analyse histologique a confirmé l’élimination des composants cellulaires tout en conservant la structure et la composition de l’ECM. Le protocole présenté fournit une méthode complète pour obtenir le DSM, offrant des applications potentielles en ingénierie tissulaire hépatique et en thérapie cellulaire. Ces résultats contribuent au développement d’approches alternatives pour le traitement de la maladie hépatique en phase terminale.
Introduction
La transplantation hépatique reste le seul traitement définitif de la maladie hépatique en phase terminale 1,2,3. Cependant, la pénurie critique et la baisse de la qualité des organes de donneurs ont accru le besoin de traitements alternatifs4. Dans le domaine de la médecine régénérative, les foies bioartificiels (BAL) utilisant une matrice hépatique décellularisée (DLM) sont apparus comme des solutions prometteuses 5,6,7. Le DLM préserve la structure hépatiqu....
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Protocole
Cette étude a été approuvée par le Comité d’éthique de l’expérimentation animale de l’Université Jiaotong de Xi’an et réalisée conformément aux directives pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire.
1. Prélèvement de la rate
- Utilisez des rats Sprague Dawley mâles pesant de 250 à 280 g. Hébergez les rats dans des pièces à température et humidité contrôlées, et fournissez-leur de la nourriture et de l’eau à volonté, sauf pour jeûner avant la chirurgie.
- Injecter par voie sous-cutanée de la buprénorphine (0,05 mL/kg) comme analgésique 1 h avant l’opération. Anesthésier le rat par inhal....
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Résultats
Ce protocole utilisait une combinaison de cycles répétés de congélation-décongélation et de perfusion avec des réactifs de décellularisation pour la décellularisation de la rate du rat. La décellularisation complète de la rate a été réalisée en environ 11 h (Figure 2A). Tout au long du processus de décellularisation, la couleur de la rate est progressivement passée d’un rouge foncé à un rouge clair tacheté, puis à un blanc translucide (Figure 2B). La morphologie.......
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Discussion
Les BAL représentent une approche efficace pour le traitement de la maladie hépatique en phase terminale, en particulier dans les cas où la transplantation hépatique est entravée par la pénurie actuelle d’organes de donneurs6. Une option prometteuse pour la création de BALs est l’utilisation de DLM, qui préserve la MEC naturelle et la structure vasculaire du foie natif. Cependant, la rareté de la DLM humaine et les risques potentiels d’infection et d’immunogénicité associés à la DLM animale posent.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont déclaré aucun conflit d’intérêts.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (82000624), le programme de recherche fondamentale en sciences naturelles du Shaanxi (2022JQ-899 et 2021JM-268), le programme de soutien à la capacité d’innovation de la province du Shaanxi (2023KJXX-030), le projet conjoint du plan de R&D de l’université de la province du Shaanxi (2021GXLH-Z-047), la fondation institutionnelle du premier hôpital affilié de l’Université Jiaotong de Xi’an (2021HL-42 et 2021HL-21).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Machine d’anesthésie | Harvard Appareil | table | d’anesthésie animale |
| Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd. | Diamètre des pores : 5 &mu ; m | prévenir les bulles d’air | |
| Buprénorphine | TIPR Pharmaceutical Responsible Co., Ltd | un analgésique | |
| Pince hémostatique | Shanghai Medical Instruments ; Co., Ltd | J31020 | outil chirurgical |
| Saline héparinée | SPH No.1 Biochimique & Pharmaceutical Co., LTD ; | prévenir la formation de thrombose ; | |
| Isoflurane | RWD life Science Co. | anesthésique :pour l’induction et le maintien de l’anesthésie | |
| Pénicilline-Streptomycine ; | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | C0222 | antibiotiques in vitro pour prévenir la contamination microbienne |
| Pompe péristaltique | Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd. | BT100-1L | |
| Saline tamponnée au phosphate | Shanghai Titan Scientific Co., Ltd. | 4481228 solution saline tampon d’acide phosphorique | |
| Tube en silicone | Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd. | 2.4&fois ; Suture en soie de 0,8 mm | |
| Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory | 6-0 et 3-0 | ligaturation des vaisseaux sanguins | |
| Dodécylsulfate de sodium | Shanghai Titan Scientific Co., Ltd. | 151-21-3 | détergent ionique, dissout les membranes cellulaires et nucléaires |
| Pompe à seringue | Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd | BeneFusion SP5 | perfusion intraveineuse |
| Triton X-100 | Shanghai Titan Scientific Co., Ltd. | 9002-93-1 | détergent non ionique, perturbe les interactions lipides-lipides, lipides-protéines et ADN-protéines |
| Cathéter veineux | B. Braun Company | 24G | insérant l’artère de la rate |
Références
- Xu, X. State of the art and perspectives in liver transplantation. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 22 (1), 1-3 (2023).
- Hautz, T., et al. Immune cell dynamics deconvoluted by single-cell RNA sequencing in normothermic machine....
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Réimpressions et autorisations
