L’importance des petites colonies dans la résistance aux médicaments de Candida spp. n’a pas été pleinement explorée. La thérapie photodynamique antimicrobienne (aPDT) offre une stratégie prometteuse contre les infections fongiques résistantes aux médicaments. Cette étude démontre que l’aPDT médiée par le bengale de la rose désactive efficacement Candida glabrata et induit de petites colonies, présentant une procédure unique.
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Article de méthode
Induction de petites colonies chez Candida glabrate via la thérapie photodynamique médiée par Rose Bengal
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Face à un taux de mortalité de 40 % chez les patients atteints de candidémie, le Candida résistant aux médicaments et ses petits mutants restent un défi thérapeutique majeur. La thérapie photodynamique antimicrobienne (aPDT) cible plusieurs structures fongiques, contrairement aux antibiotiques/antifongiques, ce qui peut contrecarrer la résistance. Les méthodes traditionnelles pour induire de petites colonies reposent sur le bromure d’éthidium ou le fluconazole, qui peuvent influencer la sensibilité aux médicaments et les réponses au stress. Cette étude a porté sur l’application d’un photosensibilisant à la lumière verte (pic de 520 nm) et au rose-bengale (RB) pour lutter contre un isolat de Candida glabrata résistant aux médicaments. Les résultats ont révélé que le traitement aPDT inhibait significativement la croissance cellulaire (réduction de ≥99,9 %) et induisait efficacement la formation de petites colonies, comme en témoigne la réduction de la taille et la perte de la coloration indicatrice redox mitochondriale. Cette étude fournit des preuves initiales que l’aPDT peut induire de petites colonies dans une souche de C. glabrata multirésistante in vitro, offrant une approche potentiellement transformatrice pour lutter contre les infections fongiques résistantes.
Introduction
Les infections fongiques, en particulier celles causées par Candida albicans et Candida glabrata, de plus en plus résistant aux médicaments, constituent une grave menace mondiale1. Ces infections peuvent être mortelles, en particulier pour les patients hospitalisés et ceux dont le système immunitaire est affaibli. L’augmentation de la résistance aux antifongiques menace le contrôle de la candidose invasive, une infection fongique grave avec une mortalité élevée, en particulier de Candida albicans2. Les souches résistantes entravent l’efficacité du traitement, ce qui peut augmenter à la fois la ....
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Protocole
1. Élevage de C. glabrata
REMARQUE : Un C. glabrata multirésistant (C2-1000907) résistant à la plupart des agents antifongiques, y compris le fluconazole, est utilisé pour les expériences. Il peut être nécessaire d’adapter les conditions expérimentales à la souche spécifique, car il peut exister des variations entre les différentes souches. Toutes les expériences ont utilisé du Candida en phase logarithmique cultivé à 25 °C (imitant l’infection naturelle) pour plus de cohérence. L’absence d’hyphes de C. glabrata simplifie la quantification par rapport à C. albicans, qui forme des hyphes à 3....
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Résultats
Les données sont présentées comme la moyenne avec ±'erreur type et ont été obtenues à partir de trois expériences indépendantes, avec au moins des triples dans chaque groupe. Les données expérimentales, y compris le dénombrement des colonies, les mesures de DO600 et les résultats de coloration TTC, ont été représentées graphiquement et analysées statistiquement à l’aide d’un logiciel graphique et statistique (voir la Table des matériaux). L’ANOVA à un facteur ou le test t a été utilis.......
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Discussion
Cette étude révèle que la PDT est la première méthode rapportée pour induire la formation de petites colonies chez Candida, surpassant les effets établis du bromure d’éthidium et du fluconazole. Cette nouvelle observation nécessite une exploration plus approfondie pour démêler ses implications à la fois pour l’éradication fongique en diminuant la virulence et l’émergence de mécanismes de résistance.
La PDT médiée par RB inhibe efficacement la croissance de C. glabrata, suggérant une a.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts.
Remerciements
Ce travail a reçu un financement du ministère de la Science et de la Technologie de Taïwan [MOST 110-2314-B-006-086-MY3], de l’Université nationale Cheng Kung [K111-B094], [K111-B095], de l’Hôpital universitaire national Cheng Kung, Taïwan [NCKUH-11204031], [NCKUMCS2022057].
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 0,22 &mu ; Filtre m | Merck, Taipei, Taïwan | Millex, SLGVR33RS | |
| 1,5 mL Tube microfuge | Neptune, San Diego, USA | #3745 | |
| 20 % Chlorure de triphényltétrazolium (TTC) | Sigma-Aldrich, MO, USA | T8877 | |
| 5 mL polypropylène tube à fond rond | Corning, AZ, USA | 352059 | |
| 5 mL tube à fond rond avec capuchon de crépine de cellule | Corning, AZ, USA | Falcon, #352235 | |
| Plaque à 96 puits | Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taïwan# | 16196 | |
| Agar | BRS, Tainan, Taïwan | AG012 | |
| Disque vierge | Advantec, Tokyo, Japon | 49005040 | |
| Centrifugeuse | Eppendorf, UK | 5415R | |
| Solution de bromure d’éthidium | Sigma-Aldrich, MO, USA | E1510 | |
| Fluconazole, 2 mg/mL | Pfizer, NY, États-Unis | BC18790248 | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software | Version 7.0 | |
| Bande de diode électroluminescente verte (LED) | Nanyi electronics Co., Ltd, Tainan, Taiwan | 5050 | Onde d’excitation : 500 ~ 550 nm |
| Basse température. secouer Incubateurs | Yihder, Taipei, Taiwan | LM-570D (R) | |
| Cotons-tiges | de soins buccauxGood Verita Enterprise, Taipei, Taïwan | 161357 | |
| Muller Hinton II | agar BD biosciences, Californie, États-Unis | 211438 | |
| Lecteur de microplaques multimode | Molecular Devices | SpectraMax i3x | |
| OD600 spectrophotomètre | Biochrom, Londres, Royaume-Uni | Ultrospec 10 | |
| Rose Bengal | Sigma-Aldrich, États-Unis | 330000 | concentration de la matière 40 mg/mL = 4 %, préparer dans du PBS, stocké à 4 ° ; C |
| Tube en verre stérilisé | Sunmei, Tainan, Taïwan | AK45048-16100 | |
| Extrait de levure Peptone Dextrose Medium | HIMEDIA, Inde | M1363 |
Références
- Soriano, A., et al. Invasive candidiasis: current clinical challenges and unmet needs in adult populations. J Antimicrob Chemother. 78 (7), 1569-1585 (2023).
- Pappas, P. G., Lionakis, M. S., Arendrup, M. C., Ostrosky-Zeichner, L., Kullberg, B. J. Invasive candidiasis. Nat Rev....
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