Um método para 2-Photon Imagens de Fluxo de Sangue no neocórtex através de uma janela Cranial
Summary
Dinâmica do fluxo sanguíneo cortical pode ser estudada in vivo por corantes fluorescentes imagem dextran injetado na veia da cauda dos roedores com 2-fótons microscopia. Este vídeo mostra como a dinâmica do fluxo sanguíneo na imagem neocórtex de ratos através de um vidro coberto de preparação janela craniana.
Abstract
A capacidade de imagem da vasculatura cerebral (a partir de navios de grande porte para capilares) e dinâmica registro de fluxo sanguíneo no cérebro dos roedores que vivem intacta é uma técnica poderosa. In vivo utilizando dois fótons de microscopia através de uma janela cranial é possível corantes fluorescentes imagem injetada por via intravenosa. Isto permite uma imagem para a vascularização cortical e também para obter medidas de fluxo sanguíneo. Esta técnica foi desenvolvida originalmente por David Kleinfeld e Winfried Denk. O método pode ser usado para estudar a dinâmica do fluxo sanguíneo durante ou após a isquemia cerebral, em doenças neurodegenerativas, em tumores cerebrais, ou na fisiologia normal do cérebro. Por exemplo, ela tem sido usada para estudar como acidente vascular cerebral provoca mudanças na direção do fluxo do sangue e alterações na velocidade de glóbulos vermelhos ou fluxo em e ao redor do infarto. Aqui demonstramos como usar dois fótons de microscopia para a dinâmica do fluxo sanguíneo imagem no neocórtex de ratos vivos usando corantes fluorescentes injetadas na veia da cauda.
Protocol
Discussion
Dinâmica do fluxo sanguíneo cortical pode ser estudada in vivo por corantes fluorescentes imagem dextran injetado na veia da cauda dos roedores com dois fótons de microscopia. Este vídeo mostra um método de imagem como a dinâmica do fluxo sanguíneo no neocórtex de camundongos através de um vidro coberto de preparação janela craniana.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fluorescein isothio-cyanate-dextran | Reagent | Sigma | FD500S | mol wt 500,000 |
| Rhodamine B isothio-cyanate-dextran | Reagent | Simga | R9379 | mol wt ~70,000 |
References
- Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex. Proc Nat Acad Sci. 95, 15741-15746 (1998).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed. Eng. Online. 17, 2-13 (2003).
- Zhang, S., Murphy, T. H. Imaging the impact of cortical microcirculation on synaptic structure and sensory-evoked hemodynamic responses in vivo. 5, (2007).
- Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex. Proc Nat Acad Sci. 104, 365-370 (2007).
