Une procédure de chirurgie Craniotomie pour l'imagerie cérébrale chronique

Résumé

Cette vidéo et le protocole de montrer comment implanter une verrière fenêtre crânienne chez les rongeurs. Ces préparations peuvent être utilisées pour les maladies chroniques in vivo à deux photons imagerie du néocortex des échelles de temps de plusieurs mois. Il peut également être utilisé pour d'autres types d'imagerie, y compris l'imagerie signal optique intrinsèque.

Résumé

Les techniques d'imagerie sont de plus en plus important dans le fonctionnement du cerveau étude. Parmi eux, microscopie à deux photons laser à balayage a émergé comme une méthode extrêmement utile, car elle permet l'étude du cerveau vivre intacte. Avec une préparation appropriée, cette technique permet l'observation de la même zone corticale chronique, de quelques minutes à plusieurs mois. Dans cette vidéo, nous montrons une préparation pour l'imagerie in vivo chroniques du cerveau en utilisant microscopie à deux photons. Cette technique a été initialement mis au point par le Dr Karel Svoboda, qui est maintenant un Howard Hughes Medical Institute à Janelia ferme. Les préparatifs comme celui illustré ici peut être utilisé pour l'imagerie de la structure du néocortex (par exemple, la dynamique dendritiques et axonales), pour enregistrer l'activité neuronale en utilisant des colorants sensibles au calcium, à l'image dynamique du flux sanguin cortical, ou pour les études d'imagerie optique intrinsèque. Imagerie profonde du néocortex est possible avec optimale chirurgies fenêtre crânienne. D'exploitation dans les conditions les plus stériles possibles pour éviter les infections, avec l'aide d'un soin extrême de ne pas endommager la dure-mère pendant la chirurgie, entraînera réussie et durable de verre recouverte de fenêtres crâniennes.

Protocole

1. Anesthetize souris avec l'isoflurane (4% pour l'induction, de 1,5-2% pour la chirurgie) à l'aide du IACUC procédures approuvées. Il est important que la queue et / ou pincées orteils sont utilisées afin de s'assurer que l'animal est complètement sous sédation.
2. L'utilisation d'un coupe-rongeurs, raser les poils du dos de la nuque jusqu'aux yeux.
3. Placez la souris dans un cadre stéréotaxique, au cours d'une chirurgie de l'eau de recirculation couverture. De fixer solidement la tête avec des barres de l'oreille.
4. Appliquer une pommade oculaire, afin d'empêcher l'œil de l'animal de se dessécher.

Discussion

Comme nous l'avons montré dans la vidéo et dans les figures complémentaires, la préparation fenêtre crânienne, combinées avec l'utilisation de microscopie à deux photons, est un outil très puissant pour étudier in vivo la structure et la fonction du néocortex. La technique requiert une formation rigoureuse pour se familiariser avec l'anatomie pertinentes et les procédures chirurgicales fines et les compétences que requiert cette préparation. Seuls les chirurgies vierges peuvent être utilisés pour l'imagerie chronique. Si la .......

Matériaux

Barres de titane sont fabriquées sur mesure