Vivo फीट 2 फोटॉन परत में कैल्शियम इमेजिंग / 2 चूहे के 3
Summary
Neocortex में microcircuits के नेटवर्क की गतिशीलता को समझने के लिए, यह एक साथ न्यूरॉन्स की एक बड़ी संख्या की गतिविधि को रिकॉर्ड करने के लिए आवश्यक है. Vivo में दो photon कैल्शियम इमेजिंग केवल एक ही तरीका है कि एक एकल कोशिका संकल्प के साथ एक घने neuronal जनसंख्या का गतिविधि रिकॉर्ड करने की अनुमति देता है.
Abstract
Neocortex में microcircuits के नेटवर्क की गतिशीलता को समझने के लिए, यह एक साथ न्यूरॉन्स की एक बड़ी संख्या की गतिविधि को रिकॉर्ड करने के लिए आवश्यक है. Vivo में दो photon कैल्शियम इमेजिंग केवल एक ही तरीका है कि एक एकल कोशिका संकल्प के साथ एक घने neuronal जनसंख्या का गतिविधि रिकॉर्ड करने की अनुमति देता है. विधि एक कपाल इमेजिंग खिड़की दाखिल, एक फ्लोरोसेंट कैल्शियम सूचक डाई है कि न्यूरॉन्स की बड़ी संख्या के द्वारा लिया जा सकता है और अंत में एक में vivo दो फोटॉन माइक्रोस्कोप का उपयोग कर समय व्यतीत हो कैल्शियम इमेजिंग के साथ न्यूरॉन्स की गतिविधि रिकॉर्डिंग इंजेक्शन में होते हैं. Astrocyte विशिष्ट रंगों के सह – इंजेक्शन एक astrocytes से न्यूरॉन्स अंतर करने के लिए अनुमति देता है. तकनीक चूहों में कोशिकाओं के विभिन्न समूहों के नेटवर्क बातचीत के लिए बेहतर समझने के लिए न्यूरॉन्स के विशिष्ट उप – जनसंख्या में फ्लोरोसेंट अणु व्यक्त किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
electrophysiological रिकॉर्डिंग पर इस विधि का लाभ यह है कि यह कम आक्रामक है और घने neuronal neuronal नेटवर्क में गतिविधि की रिकॉर्डिंग की अनुमति देता है है. जब इस प्रक्रिया कर रही यह महत्वपूर्ण है के लिए अत्यधिक ध्यान रखना जब craniotomy प्रदर…
Acknowledgements
हम कैल्शियम संकेतकों के थोक लोड हो रहा है के अनुकूलन पर उपयोगी विचार – विमर्श के लिए ओल्गा Garaschuk स्वीकार करते हैं करना चाहते हैं.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Oregon Green BAPTA1-AM | Reagent | Invitrogen | O-6807 | |
| Fluo 4- AM | Reagent | Invitrogen | F-14201 | |
| Sulforhodamine 101 | Reagent | Invitrogen | S-359 | |
| Pluronic F-127 in DMSO | Reagent | Invitrogen | P-3000MP | |
| Centrifugal Filter (0.45 micron) | Reagent | Millipore | UFC3 0HV 0S |
References
- Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo. Nat Protoc. 1, (2006).
- Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc Natl Acad Sci USA. 100, 7319-7324 (2003).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online 2:13. Biomed Eng Online. 2, (2003).
