هذا الفيديو يبين عملية خلية كاملة التسجيلات المشبك الجهد في شريحة الشبكية من السمندل النمر المائية. نبدي استعدادا لشريحة وكذلك كيفية تنفيذ تسجيلات المشبك التصحيح خلال التحفيز البصري لشبكية العين.
Abstract
نستخدم المشبك التصحيح خلية كاملة لدراسة تقنية الدارات متشابك التي ترتكز عليها معالجة المعلومات البصرية في الشبكية. في هذا الفيديو ، فإننا سوف دليل لكم من خلال عملية تنفيذ كامل الخلية تسجيلات ضوء التيارات أثار الخلايا الفردية في إعداد شريحة الشبكية. نستخدم نمر المائية السمندل كنموذج للحيوانات. نبدأ بوصف تشريح العين وكيفية عرض الشرائح هي التي شنت للتسجيلات الكهربية. مرة واحدة يتم وضع شريحة في غرفة تسجيل ، ونحن لشرح كيفية تنفيذ كامل الخلية التسجيلات المشبك الجهد. نحن المشروع ثم محفزات بصرية وعلى المستقبلات الضوئية في لانتزاع شريحة ضوئية أثار ردود الحالي. خلال تسجيل يروي لنا شريحة مع وكلاء الدوائية ، حيث نظام الارواء 8 قنوات تسمح لنا التبديل بسرعة بين وكلاء مختلفة. ويستخدم على نطاق واسع في إعداد شريحة الشبكية للتسجيلات المشبك التصحيح في شبكية العين ، لا سيما لدراسة الخلايا أو عديم الاستطالات القطبين ، والتي لا يمكن الوصول إليها في إعداد كامل جبل.
Protocol
الحلول الحل بين الخلايا لخلايا العقدة (مم) : 100 K – غلوكونات ، 8 بوكل ، 1 MgCl 2 ، 1 EGTA ، 10 HEPES ، 4 ATP ، GTP 0.5 و 90 ميكرومتر Sulforhodamine باء (لتلوين) ، بعد تعديلها لدرجة الحموضة = 7.4 مع KOH الحل بين الخلايا لخ…
Discussion
الفوائد :
جميع أنواع الخلايا متاحة
من السهل تحديد من أنواع الخلايا ، وبخاصة إذا تم إضافة صبغة الفلورسنت إلى الحل الكهربائي
ويمكن الوصول بسهولة وكلاء الدوائية الخلاي?…
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Multiclamp 700A
Patch Clamp Amplifier
Molecular Devices
SZX9
Dissection Micropscope
Olympus
BX50WI
Upright Microscope
Olympus
Equipped with 40x, 10x water immersion objective, fluorescent filters and mercury lamp
Werner, B., Cook, P. B., Passaglia, C. L. Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice. J. Vis. Exp. (17), e771, doi:10.3791/771 (2008).