Generatie van beenmerg afgeleide Murine dendritische cellen voor gebruik in twee-foton Imaging

Summary

Antigeen presentatie in secundaire lymfoïde organen door de dendritische cellen is cruciaal voor de opening van het T-cel gemedieerde adaptieve immuunrespons. Hier laten we zien de cultuur van beenmerg afgeleide dendritische cellen van muizen, activering, en de etikettering voor 2-photon imaging.

Abstract

Verschillende methoden voor de bereiding van muizen dendritische cellen kan worden gevonden in de literatuur. Hier presenteren we een methode die meer dan 85% CD11c hoge dendritische cellen produceert in cultuur die de thuishaven van de drainerende lymfeklier na subcutane injectie en presenteren antigeen aan antigeen specifieke T-cellen (zie video). Daarnaast maken we gebruik van Essen Instruments Incucyte naar dendritische cel rijping, waar, op dag 10, de morfologie van de gekweekte cellen is typerend voor een rijpe dendritische cel en <85% van de cellen zijn CD11chigh track. De studie van antigeen presentatie in perifere lymfeklieren door twee-foton beeldvorming bleek dat er drie verschillende fasen van dendritische cel en T-cel interactie ^{1, 2.} Fase I bestaat uit korte seriële contacten tussen zeer beweeglijke antigeen specifieke T cellen en antigen dragen dendritische cellen ^{1, 2.} Fase twee wordt gekenmerkt door langdurige contacten tussen antigeen-specifieke T-cel en antigeen met dendritische cellen ^{1, 2.} Tot slot wordt fase III kenmerkt zich door T-cellen losmaken van dendritische cellen, het herwinnen van de beweeglijkheid en het begin tot het ^{1, 2} delen. Dit is een voorbeeld van het type van antigeen-specifieke interacties die kunnen worden geanalyseerd door twee-foton beeldvorming van antigeen-beladen cellen tracker dye-gelabelde dendritische cellen.

Protocol

1) Verwijder beide dijbeen botten van een muis Gebruik dissectie schaar weg te snijden spieren en het dijbeen bot bloot boven en onder de gewrichten (knie en heup). Pak het midden van het dijbeen met de dissectie een pincet en snijd boven en onder de gewrichten om zoveel mogelijk van de epifyse als mogelijk intact laten. Schoon uit zo veel spieren als mogelijk met behulp van kleine dissectie schaar. Overdracht het dijbeen in een schaal van RPMI. Alle procedures moeten worden uitgevoerd in d…

Discussion

Dendritische cellen zijn de belangrijkste bemiddelaars van de adaptieve immuunrespons en de meest efficiënte antigeen presenterende cel gekenmerkt to-date. Methoden voor mens en muis dendritische cel-cultuur in de literatuur verschillen in de aard van de cytokines gebruikt om de ontwikkeling van de verschillende soorten dendritische cel beïnvloeden. Met name zijn GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa en IFN-gamma gebruikt in verschillende combinaties te produceren volwassen, onvolwassen, ontstekings-en steady-state, zoals muizen beenmerg afg…