הדור של מח עצם נגזר תאים דנדריטים Murine לשימוש 2-פוטון הדמיה
Summary
מצגת Antigen באיברים הלימפה משני על ידי התאים הדנדריטים הוא קריטי עבור ייזום של תא T בתיווך תגובה חיסונית אדפטיבית. כאן אנו מדגימים את התרבות של מוח העצם נגזר תאים דנדריטים Murine, הפעלה, וסימון עבור הדמיה 2-פוטון.
Abstract
כמה שיטות להכנת תאים דנדריטים Murine ניתן למצוא בספרות. כאן, אנו מציגים שיטה המייצרת יותר מ 85% תאים דנדריטים CD11c גבוה תרבות הביתה הצומת לימפה ניקוז לאחר הזרקה תת עורית ו אנטיגן ספציפי לערמונית להציג לתאי T (ראה וידאו). בנוסף, אנו משתמשים מכשירים אסן Incucyte לעקוב אחר ההבשלה תאים דנדריטים, שם, ב 10 יום, את המורפולוגיה של תאים בתרבית אופייני של תא בוגר הדנדריטים <85% של תאים CD11chigh. המחקר של המצגת אנטיגן בבלוטות הלימפה הפריפריה על ידי 2-פוטון הדמיה עולה כי ישנם שלושה שלבים ברורים של תאים דנדריטים ואינטראקציה תא T 1, 2. שלב I מורכב הקשר בין ניעתי סדרתי קצר מאוד ספציפי אנטיגן בתאי T אנטיגן נושאת תאים דנדריטים 1, 2. השלב השני מתאפיין מגעים ממושכים בין תא-T ו אנטיגן ספציפי אנטיגן נושאות תאים דנדריטים 1, 2. ולבסוף, בשלב השלישי מאופיין בתאי T ניתוק מן התאים הדנדריטים, החזרת תנועתיות ומתחיל לחלק 1, 2. זוהי דוגמה אחת לסוג של אנטיגן ספציפי לערמונית אינטראקציות כי ניתן לנתח על ידי הדמיה שני הפוטונים של אנטיגן טעון תא גשש צבען שכותרתו תאים דנדריטים.
Protocol
Discussion
התאים הדנדריטים הם המתווכים העיקריים של התגובה החיסונית הסתגלות התא אנטיגן היעילה ביותר להציג מאופיינת עד כה. שיטות אדם העכבר תרבית תאים דנדריטים בספרות נבדלות בסוג של ציטוקינים להשתמש כדי להשפיע על התפתחות סוגים שונים של תאים דנדריטים. יש לציין, GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alpha ו – IFN-gamma מש…
Acknowledgements
National Institutes of Health אחווה אחוות Kirchstein predoctoral AI-64128 (MPM), GM-41514 (MDC), GM-48071 (IP)
References
- Miller, M. J., Safrina, O., Parker, I., Cahalan, M. D. Imaging the single cell dynamics of CD4+ T cell activation by dendritic cells in lymph nodes. J Exp Med. 200, 847-856 (2004).
- Henrickson, S. E., et al. T cell sensing of antigen dose governs interactive behavior with dendritic cells and sets a threshold for T cell activation. Nat Immunol. 9, 282-291 (2008).
- Jefford, M., et al. Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli. Blood. 102, 1753-1763 (2003).
- Inaba, K., et al. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J Exp Med. 176, 1693-1702 (1992).
- Lutz, M. B., et al. Differential functions of IL-4 receptor types I and II for dendritic cell maturation and IL-12 production and their dependency on GM-CSF. J Immunol. 169, 3574-3580 (2002).
- Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking. J Immunol. 179, 7577-7584 (2007).
- Inaba, K., Swiggard, W. J., Steinman, R. M., Romani, N., Schuler, G. Isolation of dendritic cells. Curr Protoc Immunol. 3, (2001).
- Winzler, C., et al. Maturation stages of mouse dendritic cells in growth factor-dependent long-term cultures. J Exp Med. 185, 317-328 (1997).
- Koch, F., et al. Tumor necrosis factor alpha maintains the viability of murine epidermal Langerhans cells in culture, but in contrast to granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, without inducing their functional maturation. J Exp Med. 171, 159-171 (1990).
- Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
- Wei, S. H., et al. Ca2+ signals in CD4+ T cells during early contacts with antigen-bearing dendritic cells in lymph node. J Immunol. 179, 1586-1594 (2007).
- Castellino, F., et al. Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction. Nature. 440, 890-895 (2006).
