Генерация костного мозга мышей Производные дендритных клеток для использования в 2-фотонных изображений
Summary
Антиген презентации во вторичных лимфоидных органах по дендритных клеток имеет решающее значение для инициирования Т-клеток опосредованный адаптивный иммунный ответ. Здесь мы показываем, культуре костного мозга производных мышиных дендритных клеток, активации, и маркировки для 2-фотонного изображения.
Abstract
Существует несколько методов для подготовки мышиных дендритных клеток можно найти в литературе. Здесь мы представляем метод, который производит более 85% CD11c высокой дендритных клеток в культуре, дома дренаж лимфатических узлов после подкожного введения и настоящего антигена антиген специфический Т-клеток (см. видео). Кроме того, мы используем инструменты Эссен Incucyte отслеживать созревание дендритных камеру, где, в день 10, морфология культивируемых клеток характерна для зрелых дендритных клеток и <85% клеток CD11chigh. Изучение презентации антигена в периферических лимфатических узлов на 2-фотонных изображений показал, что Существуют три различных этапа дендритных клеток и Т-клеточного взаимодействия 1, 2. Этап I состоит из краткого серийный контактов между высоко подвижных антиген специфический Т-клеток и антигена проведения дендритные клетки 1, 2. Второй этап характеризуется длительным контактам между антиген-специфических Т-клеток и антигена подшипников дендритные клетки 1, 2. Наконец, фаза III характеризуется Т-клеток, отходящие от дендритных клеток, восстановление подвижности и начинают делить 1, 2. Это один из примеров типа антиген-специфические взаимодействия, которые могут быть проанализированы двухфотонного изображения антиген-загружалась ячейки трекер красителя меченных дендритные клетки.
Protocol
Discussion
Дендритные клетки являются ключевыми медиаторами адаптивного иммунного ответа и наиболее эффективным антигенпрезентирующие клетка характеризуется на сегодняшний день. Методы человека и мыши дендритных клеток культуры в литературе различаются по типу цитокинов использовать для влияния на ра?…
Acknowledgements
Национальные институты здоровья Kirchstein стипендий predoctoral общение АИ-64 128 (MPM), GM-41514 (MDC), GM-48071 (IP)
References
- Miller, M. J., Safrina, O., Parker, I., Cahalan, M. D. Imaging the single cell dynamics of CD4+ T cell activation by dendritic cells in lymph nodes. J Exp Med. 200, 847-856 (2004).
- Henrickson, S. E., et al. T cell sensing of antigen dose governs interactive behavior with dendritic cells and sets a threshold for T cell activation. Nat Immunol. 9, 282-291 (2008).
- Jefford, M., et al. Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli. Blood. 102, 1753-1763 (2003).
- Inaba, K., et al. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J Exp Med. 176, 1693-1702 (1992).
- Lutz, M. B., et al. Differential functions of IL-4 receptor types I and II for dendritic cell maturation and IL-12 production and their dependency on GM-CSF. J Immunol. 169, 3574-3580 (2002).
- Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking. J Immunol. 179, 7577-7584 (2007).
- Inaba, K., Swiggard, W. J., Steinman, R. M., Romani, N., Schuler, G. Isolation of dendritic cells. Curr Protoc Immunol. 3, (2001).
- Winzler, C., et al. Maturation stages of mouse dendritic cells in growth factor-dependent long-term cultures. J Exp Med. 185, 317-328 (1997).
- Koch, F., et al. Tumor necrosis factor alpha maintains the viability of murine epidermal Langerhans cells in culture, but in contrast to granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, without inducing their functional maturation. J Exp Med. 171, 159-171 (1990).
- Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
- Wei, S. H., et al. Ca2+ signals in CD4+ T cells during early contacts with antigen-bearing dendritic cells in lymph node. J Immunol. 179, 1586-1594 (2007).
- Castellino, F., et al. Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction. Nature. 440, 890-895 (2006).
