Generación de médula ósea procedentes de células murinas dendríticas para su uso en dos fotones de imágenes
Summary
La presentación de antígenos en los órganos linfoides secundarios por las células dendríticas es fundamental para el inicio de la célula T mediada por la respuesta inmune adaptativa. Aquí se demuestra la cultura de la médula ósea procedentes de células dendríticas murinas, la activación, y el etiquetado de dos fotones de imágenes.
Abstract
Existen varios métodos para la preparación de las células dendríticas murinas se puede encontrar en la literatura. A continuación, presentamos un método que produce más del 85% CD11c células dendríticas de alta en la cultura de que el hogar de los ganglios linfáticos que drenan después de la inyección subcutánea, y presentan el antígeno a las células T antígeno específicas (ver video). Además, utilizamos instrumentos Essen Incucyte para realizar un seguimiento de maduración de células dendríticas, donde, el día 10, la morfología de las células en cultivo es típico de una célula madura dendríticas y <85% de las células son CD11chigh. El estudio de la presentación de antígenos en los ganglios linfáticos periféricos de dos fotones de imagen reveló que hay tres fases distintas de las células dendríticas y la interacción de las células T 1, 2. La Fase I se compone de breves contactos en serie entre las células T antígeno específicas muy móviles y el antígeno de llevar a las células dendríticas 1, 2. La segunda fase está marcada por los contactos prolongados entre los antígenos específicos de células T y células dendríticas antígeno teniendo 1, 2. Por último, la fase III se caracteriza por células T desprenderse de las células dendríticas, la recuperación de la motilidad y comienza a dividir 1, 2. Este es un ejemplo del tipo de antígeno específico de las interacciones que pueden ser analizados por dos fotones de imágenes de antígenos de células cargadas de seguimiento marcado tinte células dendríticas.
Protocol
Discussion
Las células dendríticas son los principales mediadores de la respuesta inmune adaptativa y el antígeno de células más eficientes presentar caracterizado hasta la fecha. Métodos para el consumo humano y la cultura del ratón de células dendríticas en la literatura difieren en el tipo de citoquinas para influir en el desarrollo de diferentes tipos de células dendríticas. En particular, el GM-CSF, Flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa e IFN-gamma se utilizan en diferentes combinaciones para producir maduro, inmaduro, inflamatoria y de estado es…
Acknowledgements
Institutos Nacionales de Salud Kirchstein beca beca predoctoral AI-64128 (MPM), GM-41.514 (MDC), GM-48071 (IP)
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