وصفها في المختبر من خلايا المنشأ الجنينية البشرية لتصوير بالرنين المغناطيسي
Summary
في هذا الفيديو ، فإننا نبين كيفية تسمية الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) مع كلوريد المنغنيز (MnCl<sub> 2</sub>) التي يمكن أن تدخل الخلايا عبر قنوات الكالسيوم الجهد بوابات عندما كانت الخلايا النشطة بيولوجيا. بالإضافة إلى ذلك ، وتبين لنا من استخدام MnCl<sub> 2</sub> الخلوية وكيل النقيض التصوير بالرنين المغناطيسي لتحديد الجدوى من المختبر في hESC.
Abstract
وقد أظهرت الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) القدرة على استعادة عضلة القلب المصاب. وقد برز التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) باعتبارها واحدة من طرائق التصوير السائد لتقييم ترميم عضلة القلب المصاب. وعلاوة على ذلك ، تم توظيف وكلاء العلامات السابقين الحية ، مثل الحديد وأكسيد النانوية ، لتعقب وتوطين الخلايا الجذعية المزروعة. ومع ذلك ، فإن هذا الأسلوب لا مراقبة الممتلكات الأساسية البيولوجيا الخلوية بشأن الجدوى من الخلايا المزروعة. لقد كان من المعروف أن كلوريد المنغنيز (MnCl 2) يدخل الخلايا عبر الجهد بوابات الكالسيوم (كا 2 +) قنوات عندما كانت الخلايا النشطة بيولوجيا ، ويتراكم intracellularly لتوليد تأثير تقصير T 1. لذا ، نقترح أن المنغنيز الموجهة التصوير بالرنين المغناطيسي يمكن أن تكون مفيدة لمراقبة سلامة الخلية بعد زرع hESC في عضلة القلب.
في هذا الفيديو ، وسوف نعرض كيفية تسمية hESC مع MnCl (2) وكيف يمكن رؤيتها بوضوح تلك الخلايا باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي في المختبر. في الوقت نفسه ، والنشاط البيولوجي للكا 2 + القنوات سوف يتم استخدام التضمين سواء كا 2 + قناة ناهض وخصم لتقييم التغيرات المصاحبة إشارة.
Protocol
Discussion
هذه النتائج تشير إلى أن المنغنيز لا يدخل عبر قنوات الكالسيوم الجهد مسور ، ويمكن استخدامها المنغنيز كعامل النقيض من التصوير بالرنين المغناطيسي ، والتي يمكن أن تظهر أيضا بقاء الخلية. لذا ، نقترح أن المنغنيز الموجهة التصوير بالرنين المغناطيسي يمكن أن تكون مفيدة لمراقبة سلامة الخ?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Manganese chloride tetrahydrate | Reagent | Sigma | M8054 | |
| (S)-(-)-Bay K8644 | Reagent | Sigma | B133 | |
| (+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration | Reagent | Sigma | V4629 | |
| Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V | Reagent | VWR | VW 3257-1 | |
| Feridex I.V. | Reagent | Berlex Laboratories | NDC 59338-7035-5 | ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL |
| Protamine sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners | NDC 63323-229-05 | 50 mg (10 mg/mL) |
| Knockout SR (Serum replacement for ES cells) | Reagent | Gibco | 10828 | |
| DMEM/F12 (1:1) | Reagent | Gibco | 11330 | |
| 2- mercaptoethanol 98+% | Reagent | Sigma | M 3148 | |
| L-Glutamine 200mM 100x | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution | Reagent | Gibco | 11140 | |
| Signa HDx 3T MRI | Tool | GE Medical Systems | ||
| clinical Knee coil | Tool | GE Medical Systems | ||
| DPBS | Reagent | Gibco | 14190 |
References
- Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts. Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).
- Aoki, I., et al. Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride. NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).
- Arbab, A. S., et al. Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI. Blood. 104, 1217-1223 (2004).
- Arbab, A. S., Frank, J. A. Cellular MRI and its role in stem cell therapy. Regen Med. 3, 199-215 (2008).
