Etichettatura in vitro di cellule staminali embrionali umane per la Risonanza Magnetica

Summary

In questo video, ci mostra come etichetta cellule staminali embrionali umane (hESC) con cloruro di manganese (MnCl₂), Che possono entrare nelle cellule attraverso i canali voltaggio-dipendenti del calcio quando le cellule sono biologicamente attivi. Inoltre, ci mostrano l'uso di MnCl₂ Cellulare come agente di contrasto per risonanza magnetica per determinare la fattibilità in vitro di hESC.

Abstract

Cellule staminali embrionali umane (hESC) hanno dimostrato la capacità di ripristinare i feriti miocardio. Risonanza magnetica (MRI) è emerso come una delle modalità di imaging predominante per valutare il restauro dei feriti miocardio. Inoltre, ex-vivo agenti etichettatura, come ad esempio nanoparticelle di ossido di ferro, sono stati impiegati per tracciare e localizzare le cellule staminali trapiantate. Tuttavia, questo metodo non controlla una proprietà fondamentale della biologia cellulare per quanto riguarda la vitalità delle cellule trapiantate. È noto che il cloruro di manganese (MnCl ₂₎ entra nelle cellule attraverso voltaggio-dipendenti del calcio (Ca ^{2 +)} canali quando le cellule sono biologicamente attivi e si accumula nelle cellule per generare T ¹ effetto accorciamento. Pertanto, si consiglia di manganese-guidata risonanza magnetica può essere utile per monitorare la vitalità cellulare dopo il trapianto di hESC nel miocardio.

In questo video, ci mostrerà come etichetta hESC con MnCl ₂ e come queste cellule può essere vista chiaramente utilizzando la risonanza magnetica in vitro. Allo stesso tempo, l'attività biologica di Ca ^{2 +-canali} saranno modulati utilizzando sia Ca ^{2 +} canali agonista e antagonista per valutare le variazioni del segnale concomitanti.

Protocol

Etichettatura di manganese di cellule staminali embrionali umane Trypsinize i gambi embrionali umane che sono state coltivate in alimentazione priva di condizioni per 5 minuti. Neutralizzare la tripsina aggiungendo terreni di coltura. Spin giù le cellule per centrifugazione a 800 rpm per 5 minuti a 20 ° Celsius. Dopo aver ri-sospendere il pellet di cellule, contare il numero di celle trypan colorazione blu. Sulla base della conta delle cellule ottenute, dividere le cellule in quattro aliquote di 3 …

Discussion

Questi risultati indicano che il manganese si entra attraverso il voltaggio-dipendente dei canali del calcio, manganese e può essere usato come agente di contrasto per risonanza magnetica, che può anche mostrare la vitalità cellulare. Pertanto, si consiglia di manganese-guidata risonanza magnetica può essere utile per monitorare la vitalità cellulare dopo il trapianto di cellule staminali embrionali umane nel miocardio.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Manganese chloride tetrahydrate	Reagent	Sigma	M8054
(S)-(-)-Bay K8644	Reagent	Sigma	B133
(+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration	Reagent	Sigma	V4629
Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V	Reagent	VWR	VW 3257-1
Feridex I.V.	Reagent	Berlex Laboratories	NDC 59338-7035-5	ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL
Protamine sulfate	Reagent	American Pharmaceutical Partners	NDC 63323-229-05	50 mg (10 mg/mL)
Knockout SR (Serum replacement for ES cells)	Reagent	Gibco	10828
DMEM/F12 (1:1)	Reagent	Gibco	11330
2- mercaptoethanol 98+%	Reagent	Sigma	M 3148
L-Glutamine 200mM 100x	Reagent	Gibco	25030
Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml	Reagent	Gibco	15140-122
MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution	Reagent	Gibco	11140
Signa HDx 3T MRI	Tool	GE Medical Systems
clinical Knee coil	Tool	GE Medical Systems
DPBS	Reagent	Gibco	14190