磁気共鳴イメージングのためのヒト胚性幹細胞のin vitroでラベリングの

Summary

このビデオでは、我々は、塩化マンガンを持つヒト胚性幹細胞（ヒトES細胞）（MnClラベルの作成方法を示しています₂）細胞が生物学的に活性であるときに電位依存性カルシウムチャネルを介して細胞に侵入することができます。さらに、我々は、MnClの使用方法を示して₂携帯MRI造影剤として、ヒトES細胞のin vitroでの生存率を決定する。

Abstract

ヒト胚性幹細胞（ヒトES細胞）負傷した心筋を復元する能力を実証している。磁気共鳴イメージング（MRI）は、負傷した心筋の回復を評価するための主な画像診断法の一つとして浮上している。さらに、このような酸化鉄ナノ粒子などの生体外の標識剤は、追跡するために採用し、移植された幹細胞をローカライズされています。しかし、この方法は、移植細胞の生存率に関する基本的な細胞生物学のプロパティを監視しません。それは、塩化マンガン（MnCl _2を ） _は電位依存性カルシウム（Ca ^{2 +）}細胞は生物学的に活性であるチャネルを介して細胞に入ると、T ¹短縮の効果を生成する細胞内で蓄積することが知られている。したがって、我々はマンガン誘導MRIは心筋へのhESCの移植後の細胞生存率を監視するために有用であることを示唆している。

このビデオでは、我々は、MnCl _2を 、どのようにそれらの細胞は明らかにin vitroでMRIを用いて見ることができるとヒトES細胞をラベルする方法が表示されます。それと同時に、 ^{カルシウム}の生物活性は^、+ -チャネル併用信号の変化を評価するためのCa ^{2 +}チャネルのアゴニストおよびアンタゴニストの両方を利用して変調されます。

Protocol

ヒト胚性幹細胞のマンガン標識フィーダーフリーで5分間の条件で培養されたヒト胚性の茎をトリプシン処理。培地を加えることによってトリプシンを中和する。 20℃で5分間800rpmで遠心分離によって細胞をスピンダウン摂氏。細胞ペレットを再懸濁させた後、トリパンブルー染色により細胞数をカウント。得られた細胞の数に基づいて、コニカルチューブに3万個の細胞の4つの?…

Discussion

これらの結果は、マンガンはまた、細胞の生存率を示すことができる電位依存性カルシウムチャネル、およびマンガンはMRI造影剤として使用することができる、を経由して入力していないことを示している。したがって、我々はマンガン誘導MRIは心筋にヒト胚性幹細胞の移植後の細胞生存率を監視するために有用であることを示唆している。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Manganese chloride tetrahydrate	Reagent	Sigma	M8054
(S)-(-)-Bay K8644	Reagent	Sigma	B133
(+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration	Reagent	Sigma	V4629
Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V	Reagent	VWR	VW 3257-1
Feridex I.V.	Reagent	Berlex Laboratories	NDC 59338-7035-5	ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL
Protamine sulfate	Reagent	American Pharmaceutical Partners	NDC 63323-229-05	50 mg (10 mg/mL)
Knockout SR (Serum replacement for ES cells)	Reagent	Gibco	10828
DMEM/F12 (1:1)	Reagent	Gibco	11330
2- mercaptoethanol 98+%	Reagent	Sigma	M 3148
L-Glutamine 200mM 100x	Reagent	Gibco	25030
Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml	Reagent	Gibco	15140-122
MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution	Reagent	Gibco	11140
Signa HDx 3T MRI	Tool	GE Medical Systems
clinical Knee coil	Tool	GE Medical Systems
DPBS	Reagent	Gibco	14190