В пробирке Маркировка человеческих эмбриональных стволовых клеток для магнитно-резонансная томография
Summary
В этом видео, мы показываем, как этикетка человеческих эмбриональных стволовых клеток (чЭСК) с хлористого марганца (MnCl<sub> 2</sub>), Который может проникать в клетки с помощью напряжения закрытого кальциевых каналов, когда клетки являются биологически активными. Кроме того, мы покажем использование MnCl<sub> 2</sub> Как сотовые МРТ контрастное вещество, чтобы определить жизнеспособность в пробирке из чЭСК.
Abstract
Человека эмбриональные стволовые клетки (чЭСК) продемонстрировали возможность восстановления ранения миокарда. Магнитно-резонансная томография (МРТ) стала одной из преобладающих форм изображений в целях оценки восстановления ранения миокарда. Кроме того, экс-маркировки естественных агентов, таких как железо-оксидных наночастиц, были использованы для отслеживания и локализации пересаженных стволовых клеток. Однако этот метод не контролирует основных клеточных собственности биологии относительно жизнеспособности пересаженных клеток. Было известно, что хлористого марганца (MnCl 2) входит в клетки с помощью напряжения закрытого кальция (Са 2 +) каналов, когда клетки являются биологически активными и накапливаются внутриклеточно генерировать T 1 сокращения эффекта. Таким образом, мы предполагаем, что марганец наведением МРТ может быть полезно для контроля жизнеспособности клеток после трансплантации чЭСК в миокарде.
В этом видеоролике мы покажем, как на этикетке чЭСК с MnCl 2 и как эти клетки могут быть хорошо видны с помощью МРТ в пробирке. В то же время, биологическая активность Са 2 +-каналов будет модулированного использованием как Са 2 +-канала агонистов и антагонистов для оценки сопутствующих изменений сигнала.
Protocol
Discussion
Эти результаты показывают, что марганец делает войти через напряжения закрытого кальциевых каналов, и марганца может быть использован как МРТ контрастное вещество, которое может также показать жизнеспособность клеток. Таким образом, мы предполагаем, что марганец наведением МРТ может быть полез?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Manganese chloride tetrahydrate | Reagent | Sigma | M8054 | |
| (S)-(-)-Bay K8644 | Reagent | Sigma | B133 | |
| (+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration | Reagent | Sigma | V4629 | |
| Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V | Reagent | VWR | VW 3257-1 | |
| Feridex I.V. | Reagent | Berlex Laboratories | NDC 59338-7035-5 | ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL |
| Protamine sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners | NDC 63323-229-05 | 50 mg (10 mg/mL) |
| Knockout SR (Serum replacement for ES cells) | Reagent | Gibco | 10828 | |
| DMEM/F12 (1:1) | Reagent | Gibco | 11330 | |
| 2- mercaptoethanol 98+% | Reagent | Sigma | M 3148 | |
| L-Glutamine 200mM 100x | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution | Reagent | Gibco | 11140 | |
| Signa HDx 3T MRI | Tool | GE Medical Systems | ||
| clinical Knee coil | Tool | GE Medical Systems | ||
| DPBS | Reagent | Gibco | 14190 |
References
- Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts. Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).
- Aoki, I., et al. Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride. NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).
- Arbab, A. S., et al. Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI. Blood. 104, 1217-1223 (2004).
- Arbab, A. S., Frank, J. A. Cellular MRI and its role in stem cell therapy. Regen Med. 3, 199-215 (2008).
