In vitro-märkning av mänskliga embryonala stamceller för magnetisk resonanstomografi

Summary

I denna video visar vi hur etiketten mänskliga embryonala stamceller (hESC) med manganklorid (MnCl₂) Som kan komma in i celler via spänningskänsliga kalciumkanaler när cellerna är biologiskt aktiva. Dessutom visar vi att använda MnCl₂ Som cellulära MRT kontrastmedel för att fastställa in vitro livskraft hESC.

Abstract

Mänskliga embryonala stamceller (hESC) ha visat förmåga att återställa den skadade hjärtmuskeln. Magnetisk resonanstomografi (MRT) har utvecklats till en av de dominerande avbildningsmetoder för att bedöma återställandet av den skadade hjärtmuskeln. Dessutom har ex vivo märkning medel, såsom järn-oxid nanopartiklar, använts för att spåra och lokalisera de transplanterade stamcellerna. Däremot övervakar denna metod inte en grundläggande cellbiologi egendom avseende lönsamheten hos transplanterade cellerna. Det har varit känt att manganklorid (MnCl ₂₎ kommer in i cellerna via spänningskänsliga kalcium (Ca ^{2 +)} kanaler när cellerna är biologiskt aktiva, och ackumuleras intracellulärt att generera T ¹ kortare effekt. Därför föreslår vi att mangan-styrda MRT kan vara bra att kontrollera cellviabiliteten efter transplantation av hESC i hjärtmuskeln.

I denna video visar vi hur etiketten hESC med MnCl ₂ och hur dessa celler kan tydligt ses genom att använda MRT in vitro. Samtidigt, biologisk aktivitet ^av Ca2 ^+-kanaler kommer att moduleras använda både ^{Ca2 +-kanaler} agonist och antagonist att utvärdera samtidig signal förändringar.

Protocol

Mangan Märkning av mänskliga embryonala stamcellslinjer Trypsinize den mänskliga embryonala stammar som har odlas i feeder-fri villkor i 5 minuter. Neutralisera trypsin genom att lägga till kulturen medier. Snurra ned cellerna genom att centrifugera vid 800 rpm i 5 minuter vid 20 ° Celsius. Efter att åter avbryta cellpelleten, räkna antalet celler genom trypan blå färgning. Baserat på cellen fått räkna, dela upp cellerna i fyra portioner på 3 miljoner celler i koniska rör. Pellets celle…

Discussion

Dessa resultat tyder på att mangan kommer in via spänningsstyrda kalciumantagonister, och mangan kan användas som MRT kontrastmedel, som också kan visa cellviabiliteten. Därför föreslår vi att mangan-styrda MRT kan vara bra att kontrollera cellviabiliteten efter transplantation av mänskliga embryonala stamceller i hjärtmuskeln.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Manganese chloride tetrahydrate	Reagent	Sigma	M8054
(S)-(-)-Bay K8644	Reagent	Sigma	B133
(+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration	Reagent	Sigma	V4629
Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V	Reagent	VWR	VW 3257-1
Feridex I.V.	Reagent	Berlex Laboratories	NDC 59338-7035-5	ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL
Protamine sulfate	Reagent	American Pharmaceutical Partners	NDC 63323-229-05	50 mg (10 mg/mL)
Knockout SR (Serum replacement for ES cells)	Reagent	Gibco	10828
DMEM/F12 (1:1)	Reagent	Gibco	11330
2- mercaptoethanol 98+%	Reagent	Sigma	M 3148
L-Glutamine 200mM 100x	Reagent	Gibco	25030
Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml	Reagent	Gibco	15140-122
MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution	Reagent	Gibco	11140
Signa HDx 3T MRI	Tool	GE Medical Systems
clinical Knee coil	Tool	GE Medical Systems
DPBS	Reagent	Gibco	14190