MODS의 결핵의 진단 방법과 내성 결핵을 multidrug
1The Warren Alpert Medical School of Brown University, 2Laboratorio de Investigacion de Enfermedades Infecciosas,Universidad Peruana Cayetano Heredia, 3Department of International Health,Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, 4Wellcome Trust Centre for Clinical Tropical Medicine,Imperial College London
Summary
현미경 – 관찰 약물 자화율 (MODS) 분석은 결핵의 고성능 감지 (TB)과 multidrug 모성 결핵 (MDRTB)에 대한 낮은 비용, 낮은 기술 도구입니다. 이 동영상은 MODS 액체 미디어 문화 방법을 설명합니다.
Abstract
활성 폐 결핵 환자 (TB)는 환자를 치료하고 새로운 감염을 예방 모두에 필수적인 활성 TB를 진단하고, 매년 10-15 다른 사람을 감염. 또한, 강한 결핵 (MDRTB)를 multidrug의 출현은 약제 내성의 검색이 약물 모성 변종의 확산을 막을 필요가있다는 것을 의미합니다. 현미경 – 관찰 약물 자화율 (MODS) 분석 결핵 및 MDRTB의 고성능 감지를위한 저비용, 낮은 기술 도구입니다. mycobacterium 결핵 (MTB)는 미세한 MTB의 성장은 고체 미디어 콜로니의 매크로 모양을 기다리고 이전 액체 미디어 감지하고, 수) 고체 미디어 2 이상의 액체 매체에서 빠르게 성장 1) : MODS 분석은 세 원칙을 기반으로합니다 그 성장은 subculture가 수행의 필요성을 obviating, 그것이 마약 isoniazid와 rifampicin이 MDRTB 동시에 직접 감지 수 있도록 MODS 분석에 통합할 수있는 비정형 mycobacteria이나 곰팡이 또는 세균 오염 3)에서 구분할 수 있도록, MTB의 특징입니다 간접 약물 자화율 시험. 경쟁 현재 진단은 가래 세포진 검사와 함께 낮은 감도, 고체 미디어 문화, 기존의 액체 미디어 문화 방식과 prohibitively 높은 비용, MDRTB를 탐지하기 위해 간접 약물 자화율 테스트 subculture을 필요로 진단을 때까지 긴 지연에 의해 방해하고 있습니다. 반면, 비 – 독점 MODS 방법은, 결핵 및 MDRTB에 대한 높은 감도를 가진 상대적으로 급속한 문화 방식입니다 MDRTB 동시 약물 자화율 시험을 제공하고, 결핵에 대한 테스트를 위해 단지 달러 이하 3 자원 제한 설정에 액세스할 수 있으며 MDRTB.
Protocol
재고 솔루션을 준비 인산 버퍼 주식 인산 칼륨 일염기의 솔루션 950ml (1000ml 증류수에 녹아있는 인산 칼륨 일염기의의 9.07g)과 볶음과 함께 나트륨 이염 솔루션의 950ml를 (1000ml 증류수에 녹아있는 인산 나트륨의 이염의 9.47g) 혼합, 조정 각 솔루션의 뒤로 50ml 유지 산도 필요한 경우 6.8 ± 0.2 산도를 조정 : 산도 마련에 추가 인산 나트륨 이염 솔루션, 낮은 산도로 인…
Discussion
MODS의 분석은 자원 제한 설정 대상으로합니다. 처음으로, MODS은 결핵의 빠른 액체 문화 감지 기능을 제공하고 테스트 당 단지 달러 이하 3 자원 제한 설정에 대한 내성 결핵을 multidrug. MODS이 아닌 독점적인 반복 방법론이며, MODS 커뮤니티는 항상 다른 실험실 만들 수 있었다 것을 개선에 관심을 가지고있다.
액체가 쏟았거나 aerosolized 수 있기 때문에 회귀 우려가 결핵의 액체 미디어 문화의 biosafety입니다. 우?…
Acknowledgements
우리는 결핵의 성장 시간 저속 비디오 세그먼트에 대한 숀 피츠 워터와 카르멘 Giannina 루나 콜롬보을 인정하고 싶습니다. 우리는 현재의 프로토콜은 대부분 그대로 찍은있는 사용자 가이드를 편집하는 동안 그녀의 철저하고 탁월한 의견에 마티 로퍼 감사 및 공동 제작. 이 비디오의 제작은 NIH / 포가티 국제 센터에 의해 투자되었다 http://www.fic.nih.gov/ 데이비드 AJ 무어 임페리얼 칼리지 런던 대학에서 전염병에 열대 의학 및 리더의 웰컴 트러스트 임상 연구원 (펠로우쉽으로 기여 보너스 번호 078067/Z/05). 마크 F. 브래디는 NIH / 포가티 국제 센터 연구원으로 기여.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Refrigerator/ freezer | Equipment | to store pre-prepared broth and antibiotic stocks | ||
| Vortex | Equipment | to aid sputum decontamination | ||
| Centrifuge | Equipment | for sputum concentration; capable of reaching 3000 g; does not need to be refrigerated, but MUST be biosafe (buckets can be sealed) | ||
| Incubator (37 degree C) | Equipment | for culture; need not be CO2 enriched | ||
| Inverted light microscope | Microscope | to read MODS plates | ||
| Autoclave | Equipment | to sterilize media, PBS and used plates | ||
| Balance | Equipment | to weigh isoniazid, rifampicin and NALC | ||
| Middlebrook 7H9 broth (Difco) | Reagent | Fisher | DF0713-17-9 | 500gr/bottle; culture media base |
| Casitone (pancreatic digest casein) | Reagent | Fisher | DF0259‐17‐9 | 500gr/bottle; culture media base |
| Glycerol (glycerin) lyophilized | Reagent | Sigma | G‐33‐500 | 500ml/bottle; culture media base |
| PANTA (Antibiotic mixture lyophilized BD) | Reagent | Fisher | B4345114 | 6 bottles/pack; antibiotic media supplement |
| OADC (Middlebrook OADC enrichment BD) | Reagent | Fisher | B11886 | 10 x 20ml/pack; nutritional media supplement |
| Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max) | Reagent | Sigma | D-2650 | 100ml/bottle; to prepare rifampicin stock |
| Antibiotic stocks: isoniazid | Reagent | Sigma | I-3377 | 50gr/bottle; direct susceptibility testing |
| Antibiotic stocks: rifampicin | Reagent | Sigma 99 | R-3501 | 1gr/bottle; direct susceptibility testing |
| Sodium hydroxide (pellets) | Reagent | Sigma | 221465 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
| Sodium citrate (trisodium salt dihydrate) | Reagent | Sigma | S-4641 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
| N-acetyl-L-cysteine | Reagent | Sigma | A-7250 | 50gr/bottle; sputum decontamination |
| Potassium Phosphate Monobasic crystal. KH2PO4 | Reagent | Sigma | P0662 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
| Sodium Phosphate Dibasic, anhydrous. Na2HPO4 | Reagent | Sigma | S0876 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
| Sodium hypochlorite | Reagent | household bleach | to discard contaminated waste | |
| 15ml centrifuge tubes (polypropylene 15ml Falcon 35‐2096) | Consumable | Fisher | 14‐959‐49B | 500ea/case; for sputum decontamination and concentration |
| 24 well plates (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) | Consumable | Fisher | 08-772-1 | 50 plates/case; for culture and reading |
| Sealable polythene bags 6 X 6 “ (ziplock) | Consumable | for biosecurity to contain 24 well plate | ||
| Glass tubes with lid (16 x 100mm and 18 x 145mm) | Consumable | VWR | 47729-583 | 500 tubes/case; to store aliquots of prepared broth |
| Screw cap microcentrifuge tubes (1.5ml) | Consumable | Fisher | 05‐669‐22 | 1000ea/case; to store aliquots of antibiotic stocks |
| 0.22μm filters (aqueous solvents) Syringe filter Millex blue | Consumable | Fisher | SLGL 025 OS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
| 0.22μm filters (organic solvents) Syringe filter Millex yellow | Consumable | Fisher | SLGV 033 RS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
| Disposable Pasteur pipettes borosilicate glass 9″ | Consumable | Fisher | 13‐678‐20C | 720ea/case; to mix PANTA with media mix |
| Aerosol barrier tips 1000‐1300μl | Consumable | Fisher | 02‐707‐51 | 1000ea/pk; to dispense media into plate |
| USA Scientific Tips One 1‐200μl yellow tips | Consumable | Fisher | 1111‐0006 | 1000 tips/bag; to dilute antibiotic stocks |
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Citer Cet Article
Brady, M. F., Coronel, J., Gilman, R. H., Moore, D. A. The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. J. Vis. Exp. (18), e845, doi:10.3791/845 (2008).