MODS tüberküloz tanısı için yöntem ve dirençli tüberküloz ilaca
Summary
Mikroskopik gözlem ilaç duyarlılık (MODS) tayini, düşük maliyetli, yüksek performanslı bir algılama tüberküloz (TB) ve çoklu ilaca dirençli tüberküloz (MDRTB) düşük teknolojili bir araçtır. Bu video MODS sıvı medya kültürü yöntemi açıklanmıştır.
Abstract
Aktif akciğer tüberküloz (TB) olan hastalar, hasta kür ve yeni enfeksiyonların önlenmesi için gerekli aktif verem teşhis yapma, yılda 10-15 kişi enfekte. Ayrıca, çok ilaca dirençli tüberküloz (MDRTB) ortaya çıkması, ilaç direncinin saptanması ilaca dirençli suşların yayılmasını durdurmak için gerekli anlamına gelir. Mikroskopik gözlem ilaç duyarlılık (MODS) testi, TB ve MDRTB yüksek performanslı bir algılama için düşük maliyetli, düşük teknolojili bir araçtır. Mycobacterium tuberculosis (MTB) mikroskobik MTB büyüme katı ortam kolonilerinin makroskopik görünüm için beklemek yerine sıvı ortamda daha önce tespit ve olabilir) katı ortam 2 daha sıvı ortamda hızlı büyür 1): MODS testi üç temel ilkeye dayanır büyüme altkültürü gerçekleştirmek için ihtiyaç kalmayabilir, MTB karakteristik ilaçlar izoniazid ve rifampisin MDRTB eş zamanlı olarak doğrudan tespiti için izin MODS testi dahil edilebilir atipik mikobakteriler veya mantar veya bakteriyel kontaminasyon 3) ayırt edilmesi için izin dolaylı bir ilaç duyarlılık testi. Rekabet mevcut teşhis balgam smear ile düşük hassasiyet, katı ortam kültürü, mevcut sıvı ortam kültür yöntemleri ile yasaklı yüksek maliyet ve MDRTB tespit etmek için dolaylı olarak ilaç duyarlılık testi için altkültürü yapmak ihtiyacı ile tanıya kadar uzun gecikmeler engel. Buna karşılık, ticari olmayan MODS yöntemi, TB ve MDRTB için bir yüksek hassasiyet vardır bir görece hızlı kültür yöntemi, MDRTB için eş zamanlı olarak ilaç duyarlılık testi sağlar, ve TB için test için sadece altında ABD doları 3 kaynak sınırlı ayarları erişilebilir ve MDRTB.
Protocol
Discussion
MODS tahlil, kaynak sınırlı ayarları hedeflenmektedir. Ilk kez, MODS tüberküloz hızlı sıvı kültür algılama yeteneği getiriyor ve hemen altında test başına 3 $ kaynak sınırlı ayarları dirençli tüberküloz ilaca. MODS ticari olmayan, iteratif metodoloji ve MODS topluluk her zaman diğer laboratuvarlardan yapmak başarmış iyileştirmelerini de ilgileniyor.
Sıvı dökülürse veya aerosolize olabilir, çünkü tüberküloz sıvı medya kültürü, nükseden bir endişe biyogüvenlik. MODS testi dolaylı olarak …
Acknowledgements
Biz Sean Fitzwater ve Carmen Giannina Luna Colombo tüberküloz büyüme time-lapse video segment için kabul etmek istiyorum. Biz eksiksiz ve mükemmel bir geri bildirim için geçerli protokol çoğunlukla birebir alındığı Kullanım Kılavuzu, düzenleme sırasında Marty Roper teşekkür ediyorum ve co-yazma. Bu video Üretim NIH / Fogarty Uluslararası Merkezi tarafından finanse edildi http://www.fic.nih.gov/ David AJ Moore Imperial College London Bulaşıcı Hastalıklar Tropikal Tıp ve Reader Wellcome Trust Klinik Araştırma Görevlisi (Fellowship olarak katkıda ödül sayısı 078067/Z/05). Mark F. Brady bir NIH / Fogarty Uluslararası Araştırma Merkezi Araştırma Görevlisi olarak katkıda bulundu.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Refrigerator/ freezer | Equipment | to store pre-prepared broth and antibiotic stocks | ||
| Vortex | Equipment | to aid sputum decontamination | ||
| Centrifuge | Equipment | for sputum concentration; capable of reaching 3000 g; does not need to be refrigerated, but MUST be biosafe (buckets can be sealed) | ||
| Incubator (37 degree C) | Equipment | for culture; need not be CO2 enriched | ||
| Inverted light microscope | Microscope | to read MODS plates | ||
| Autoclave | Equipment | to sterilize media, PBS and used plates | ||
| Balance | Equipment | to weigh isoniazid, rifampicin and NALC | ||
| Middlebrook 7H9 broth (Difco) | Reagent | Fisher | DF0713-17-9 | 500gr/bottle; culture media base |
| Casitone (pancreatic digest casein) | Reagent | Fisher | DF0259‐17‐9 | 500gr/bottle; culture media base |
| Glycerol (glycerin) lyophilized | Reagent | Sigma | G‐33‐500 | 500ml/bottle; culture media base |
| PANTA (Antibiotic mixture lyophilized BD) | Reagent | Fisher | B4345114 | 6 bottles/pack; antibiotic media supplement |
| OADC (Middlebrook OADC enrichment BD) | Reagent | Fisher | B11886 | 10 x 20ml/pack; nutritional media supplement |
| Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max) | Reagent | Sigma | D-2650 | 100ml/bottle; to prepare rifampicin stock |
| Antibiotic stocks: isoniazid | Reagent | Sigma | I-3377 | 50gr/bottle; direct susceptibility testing |
| Antibiotic stocks: rifampicin | Reagent | Sigma 99 | R-3501 | 1gr/bottle; direct susceptibility testing |
| Sodium hydroxide (pellets) | Reagent | Sigma | 221465 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
| Sodium citrate (trisodium salt dihydrate) | Reagent | Sigma | S-4641 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
| N-acetyl-L-cysteine | Reagent | Sigma | A-7250 | 50gr/bottle; sputum decontamination |
| Potassium Phosphate Monobasic crystal. KH2PO4 | Reagent | Sigma | P0662 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
| Sodium Phosphate Dibasic, anhydrous. Na2HPO4 | Reagent | Sigma | S0876 | 500gr/bottle; sputum decontamination |
| Sodium hypochlorite | Reagent | household bleach | to discard contaminated waste | |
| 15ml centrifuge tubes (polypropylene 15ml Falcon 35‐2096) | Consumable | Fisher | 14‐959‐49B | 500ea/case; for sputum decontamination and concentration |
| 24 well plates (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) | Consumable | Fisher | 08-772-1 | 50 plates/case; for culture and reading |
| Sealable polythene bags 6 X 6 “ (ziplock) | Consumable | for biosecurity to contain 24 well plate | ||
| Glass tubes with lid (16 x 100mm and 18 x 145mm) | Consumable | VWR | 47729-583 | 500 tubes/case; to store aliquots of prepared broth |
| Screw cap microcentrifuge tubes (1.5ml) | Consumable | Fisher | 05‐669‐22 | 1000ea/case; to store aliquots of antibiotic stocks |
| 0.22μm filters (aqueous solvents) Syringe filter Millex blue | Consumable | Fisher | SLGL 025 OS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
| 0.22μm filters (organic solvents) Syringe filter Millex yellow | Consumable | Fisher | SLGV 033 RS | 50 units/case; to filter antibiotic stocks |
| Disposable Pasteur pipettes borosilicate glass 9″ | Consumable | Fisher | 13‐678‐20C | 720ea/case; to mix PANTA with media mix |
| Aerosol barrier tips 1000‐1300μl | Consumable | Fisher | 02‐707‐51 | 1000ea/pk; to dispense media into plate |
| USA Scientific Tips One 1‐200μl yellow tips | Consumable | Fisher | 1111‐0006 | 1000 tips/bag; to dilute antibiotic stocks |
References
- Arias, M. Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis. Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).
- Caviedes, L. Rapid, efficient detection and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in sputum by microscopic observation of broth cultures. The Tuberculosis Working Group in Peru. J Clin Microbiol. 38, 1203-1203 (2000).
- Caviedes, L., Moore, D. A. Introducing MODS: a low-cost, low-tech tool for high-performance detection of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. Indian J Med Microbiol. 25, 87-87 (2007).
- Caws, M. Evaluation of the MODS culture technique for the diagnosis of tuberculous meningitis. PLoS ONE. 2, e1173-e1173 (2007).
- Ejigu, G. S. Microscopic-observation drug susceptibility assay provides rapid and reliable identification of MDR-TB. Int J Tuberc Lung Dis. 12, 332-332 (2008).
- Kim, S. J. Risk of occupational tuberculosis in National Tuberculosis Programme laboratories in Korea. Int J Tuberc Lung Dis. 11, 138-138 (2007).
- Mello, F. C. Clinical evaluation of the microscopic observation drug susceptibility assay for detection of Mycobacterium tuberculosis resistance to isoniazid or rifampin. J Clin Microbiol. 45, 3387-3387 (2007).
- Moore, D. A. Future prospects for the MODS assay in multidrug-resistant tuberculosis diagnosis. Future Microbiol. 2, 97-97 (2007).
- Moore, D. A. Infrequent MODS TB culture cross-contamination in a high-burden resource-poor setting. Diagn Microbiol Infect Dis. 56, 35-35 (2006).
- Moore, D. A. Microscopic-observation drug-susceptibility assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 355, 1539-1539 (2006).
- Moore, D. A. Microscopic observation drug susceptibility assay, a rapid, reliable diagnostic test for multidrug-resistant tuberculosis suitable for use in resource-poor settings. J Clin Microbiol. 42, 4432-4432 (2004).
- Moore, D. A., Roper, M. H. Diagnosis of smear-negative tuberculosis in people with HIV/AIDS. Lancet. 370, 1033-1033 (2007).
- Oberhelman, R. A. Improved recovery of Mycobacterium tuberculosis from children using the microscopic observation drug susceptibility method. Pediatrics. 118, e100-e100 (2006).
- Palomino, J. C., Martin, A., Portaels, F. MODS assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 356, 188-189 (2007).
- Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).
- Shiferaw, G. Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).
- Tovar, M. Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique. Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).
- Vargas, D. Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru. Lancet. 365, 150-150 (2005).
