ES תאים אנושיים: תרבות החל מ תאים קפואים

Summary

כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו מתחיל גוונים תא גזע עובריים אנושיים תרבות קו ממלאי קפוא.

Abstract

כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו מתחיל גוונים תא גזע עובריים אנושיים תרבות קו ממלאי קפוא. ראשית, 01:59 זקנה ביום העשירי של כ ס"מ צלחת אחת (שני) מוקרן מיליון תאים עובריים בעכבר פיברובלסטים מזין הוא שטף את התקשורת עם גוונים להסיר שאריות ופסולת בסרום התא, ולאחר מכן הוסיף גוונים התקשורת ועזב לאזן בתא תרבות חממה. בקבוקון קפוא של תאים לאחסון חנקן נוזלי לטווח ארוך או במקפיא-80C היא שמקורו ו שקוע במהירות באמבט מים 37C עבור הפשרה מהירה. תאים בתקשורת הקפאת יוסרו אז מן הבקבוקון והושמו כמויות גדולות של אמצעי התקשורת גוונים. נפח גדול של גוונים התקשורת מאפשר הסרת בסרום עודף DMSO, אשר יכול לגרום גוונים בתאי גזע עובריים אנושיים להבדיל. תאים הם טווה בעדינות מתוך ההשעיה, ולאחר מכן מחדש תלויה בנפח קטן של התקשורת גוונים טרי המשמש מכן זרע את הצלחת MEF. זה נחשב חשוב הזרע צלחת MEF בעדינות על ידי הוספת תאים גוונים בצורה טיפה חכם כדי לפזר אותם באופן שווה לאורך כל הצלחת. הגוונים שהוקם צלחת תרבות מוחזר בחממה במשך 48 שעות לפני התקשורת מוחלף, ואז מוזן כל 24 שעות לאחר מכן.

Protocol

הפשירי ממלאי קפוא: לפני ההפשרה התאים גוונים, להבטיח את הצלחת MEF יש לך כבר מוכנה היא מצופה כראוי במצב טוב. אל תנסה להשתמש פחות רצוי צלחת, או אחד כי הוא יותר מבוגר שלושה ימים. מומלץ לסמן …

Discussion

בסרטון הזה, אנו מראים כיצד במעבדה שלנו שגרתי קובעת גוונים אנושיים עובריים תרבות נובעות המניות קפוא. תהליך זה הוא נוח לשימוש כללי עם תא יונקים אם קפוא בפתרון DMSO. יעיל הפשרה הוא חיוני לכינון תרבות חדשה של תאים גוונים ממלאי קפוא, ואת חשובה העקביות ניסיוני.

Materials

HuES media 651.5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6.5 ml Glutamin 6.5 ml NEAA 6.5 ml beta-mercaptoethanol 0.5ul KO Serum Replacement 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng/mL final) 0.65 ml