Överleva Stereotaxic Kirurgi hos gnagare
Summary
Övervakningen av extracellulära neurotransmittorn nivåer i olika områden i hjärnan av fritt flytta djur ger insikter om sambandet mellan frisättningen av neurotransmittorer och beteende. In vivo mikrodialys i kombination med elektrokemisk detektion ger utmärkt anatomiska och kemiska upplösning, och information om hur basala neurotransmissionen ändras genom farmakologiska eller fysiologiska manipulationer.
Abstract
Förmågan att mäta extracellulära basala nivåer av signalsubstanser i hjärnan hos vakna djur gör det möjligt för bestämning av effekterna av olika systemiska utmaningar (farmakologisk eller fysiologiska) till CNS. Till exempel kan man mäta direkt hur djurets mitthjärnan dopamin prognoser svara på dopamin-frisättande läkemedel som d-amfetamin eller naturliga stimuli såsom mat. I denna video visar vi hur du implantat vägleda kanyler inriktas på specifika platser i råtta hjärnan, hur du infogar och implantat en mikrodialys sond och hur du använder höga kromatografi prestanda vätska i kombination med elektrokemisk detektion (HPLC-EG) för att mäta extracellulära nivåer av oxiderbara signalsubstanser och metaboliter. Lokala exakt införandet av droger genom mikrodialys sond möjliggör förfinad arbete på plats specificitet i en sammansatt s verkningsmekanism. Denna teknik har utmärkta anatomiska och kemiska upplösning men bara blygsamma tidsupplösning som mikrodialys prover brukar behandlas varje 20-30 minuter för att se till detekterbara signalsubstansen nivåer. Kompletterande ex vivo-verktyg (dvs, skiva och cellodling elektrofysiologi) kan hjälpa till med övervakning i realtid neurotransmission.
Protocol
Discussion
In vivo mikrodialys är det bästa sättet för att mäta olika signalsubstanser och metaboliter i olika hjärna platser i ett levande djur. Övervakar dock bara extracellulära nivåer av neurochemicals och det ger inte tidsupplösningen att övervaka exocytos av neurotransmittorer i realtid. Genom en version av den teknik som kallas "net-flux", kan den verkliga signalsubstansen koncentration vid en viss plats beräknas, vilket i sin tur kan ge exakta mätningar av signalsubstansen andelen återupptagshämmare genom plasmamembran…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Med stöd av DK065872 (ENP), en Smith Family Foundation Award of Excellence inom biomedicinsk forskning (ENP), F31 DA023760.
References
- Bungay, P. M., Newton-Vinson, P., Isele, W., Garris, P. A., Justice, J. B. Microdialysis of dopamine interpreted with quantitative model incorporating probe implantation trauma. J. Neurochem. 86, 932-946 (2003).
- Chen, K. C. Effects of tissue trauma on the characteristics of microdialysis zero-net-flux method sampling neurotransmitters. Journal of Theor. Biology. 238, 863-881 (2006).
- Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats. FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).
- Pothos, E. N., Creese, I., Hoebel, B. G. Restricted eating with weight loss selectively decreases extracellular dopamine in the nucleus accumbens and alters dopamine response to amphetamine, morphine and food intake. The Journal of Neuroscience. 15, 6640-6650 (1995).
