Изображениями создания эффектов памяти Т-клеток в ухо после индукции приемных DTH
Summary
Здесь мы показываем, способ индуцирования и записи хода замедленного типа, гиперчувствительность (DTH) реакции у крыс уха. Это сопровождается демонстрацией подготовки крысы ткани уха в течение двух-фотонной визуализации эффектор / память ответа Т-клеток.
Abstract
Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является иммунная реакция, в которой основными игроками являются CCR7 – эффектор / память Т-лимфоцитов. Здесь мы демонстрируем метод для стимулирования и записи хода DTH реакцию у крыс уха. Это сопровождается демонстрацией подготовки крысы ткани уха в течение двух-фотонной визуализации CCR7 – эффектор / память ответа Т-клеток.
Приемные DTH индуцирована при введении препарата в GFP-меченых Ova конкретных CCR7 – эффектор / память линии Т-клеток (Битон, С J. Визуализированные Эксперименты, выпуск 8). Затем клетки позволили, чтобы уравновесить у крыс в течение 48 часов до заражения путем введения одного уха физиологическим раствором (контроль уха), а другая с 1:01 смесь яиц и Ova сопряженных в Техас-красный (Ова-TR), чтобы позволить визуализации резидентов антиген-представляющих клеток.
Мы опишем метод подготовки ткани полезны для работы с изображениями подвижность клеток в глубокие слой кожи во время иммунного ответа, в сочетании с визуализацией коллагеновых волокон путем генерации второй гармоники. Ухо ткань разрезают на 5 х 5 мм квадраты (немного больше, тем лучше) и монтируются на пластиковые скользит покрова с использованием Vetbond ™, которые затем крепится с помощью силиконовой смазки в камеру изображения и superfused кислородом-пузырилась культуральной среде ткани при температуре 37 ° C .
Protocol
References
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity. J Immunol. 147, 816-822 (1991).
- Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).
- Kawakami, N., et al. Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion. J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
- Matheu, M. P. B., A, C. G. a. r. c. i. a., Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block. Immunity. , (2008).
