Işık Parlaklıkları değişiklikler Zebra balığı, Duyarlılık Tedbir Davranış Testi
Summary
Görsel-Motor Yanıt hafif artışlarla ve azaltır yanıt larva zebrafish motor çıkışını ölçmek için geliştirdi. Biz de dahil olmak üzere başka bir görme testi optokinetik refleks tarafından test edildiğinde tamamen kör olduğu düşünülüyordu optokinetik yanıt (NRC) mutantlar, hiçbir zebrafish vizyon mutant inceledi.
Abstract
Optokinetik refleks (okr) temel bir görme refleksi en omurgalılar tarafından sergilenen ve görsel sahne göreceli göz istikrara önemli bir rol oynar. Ancak okr, bir hayvan hareketli çizgiler tespit gerektirir ve bir okr sergi için başarısız balık tamamen kör olmayabilir mümkündür. Bir zebrafish mutant, hiçbir optokinetik yanıt c (NRC), herhangi bir ışık koşulları altında test edilmiş ve tamamen kör olduğu bildirildi hiçbir okr vardır. Daha önce, bu mutant OFF-ganglion hücre aktivitesi kaydedilebilir olduğunu göstermiştir. NRC mutant olarak hiçbir okr mutant balık, basit ışık artışlarla ve görsel motor davranış assay (VMR) geliştirdi azaltır tespit olup olmadığını belirlemek için. Bu testte, tek Zebra balığı larvaları otomatik bir video izleme sistemi kullanılarak larvaların eş zamanlı izleme sağlayan bir 96 plaka her kuyuda yerleştirilir. 30 dakika ve 30 dakika hafif OFF ışığı her larva lokomotor yanıtları kaydedildi ve ölçüldü. WT balık, irkilme tepkisi olarak bilinen, alt daha bazal aktivite dönüşü takip ON ışıklar, motor aktivite kısa bir başak üzerine bir dondurma olarak adlandırılan. WT balık (birkaç dakika içinde) başlangıç lokomotor aktivite dönmek de keskin ışıklar kapalı aşağıdaki hemen lokomotor aktivite artışı ve ancak yavaş yavaş. NRC mutantlar WT balık gibi KAPALI ışığa benzer bir tepki, ama WT balık ile karşılaştırıldığında ortalama aktivite hafif bir azalma gösterebilir. NRC mutantlar ON ışığa tepki olarak motor aktivitede gecikmiş ve halsiz. NRC mutant yanıt yanıt ON WT ışık lambası yavaş bir yükselme zamanı vardır. NRC balık tamamen kör olduğunu işaret etmektedir. Teleosts olmayan retina dokuları ışık tespit Çünkü, biz ışık yoğunluğu değişiklikleri hemen davranışsal tepkilerin tamamen gelişiminin erken evrelerinde gözleri eksikliği chokh (chk) mutantlar kullanarak sağlam göz gerektirir doğruladı. Bizim VMR tayininde, chk mutantlar lateral gözler, bu davranışı aracılık gösteren ya ON ışık ya da KAPALI hiçbir irkilme tepkisi gösterir. VMR testi burada ışık şiddetlerinde değişikliklere yanıt Zebra balığı larvalarının yeteneğini test değildir köklü okr tahlil tamamlar nitelendirdi. Ayrıca, VMR testinin otomasyon ışık şiddeti tahrik görsel tepkiler kusurları için yüksek verimlilik tarama kendisini katıyor.
Protocol
Discussion
Film gösteren deneysel prosedürleri WT balık bütün temsilcisi. Ancak, bu deneyler de mutant balık (temsili bir sonuç bölümüne bakınız) analog olarak yapılabilir. Biz optimal kontrol amaçlı bir denetimi kurulu anahat aynı plaka plaka WT balık ve mutant balık öneririz.
WT balık aynı plaka üzerinde mutant balık, balık türü, her bir kuyunun kaplama ne yazmak emin olun. Burada her iyi kaplama balık (veri levha ile not defteri göster) takip etmek için nasıl bir öneri.
Ayrıca, bu günün aynı zamand…
Acknowledgements
Bu çalışma, Ulusal Sağlık Hibeler EY0081 ve 5T32UY07145 Enstitüsü tarafından ve Tapınak Şövalyeleri Göz Vakfı tarafından desteklenmiştir. Jason Rihel Yaşam Bilimleri Araştırma Vakfı Bristol-Squibb üyesidir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Microplate devices | Tool | Whatman | 7701-1651 | |
| Transfer pipetes | Tool | VWR | 202205 | |
| Fish water | Reagent | refer to reference #4 | ||
| Recording chambers (Zebrabox) | Tool | Viewpoint Lifesciences | ||
| Videotrack Software | Tool | Viewpoint Lifesciences |
References
- Allwardt, A. B., Lall, B. A., Brockerhoff, S. E. Synapse formation is arrested in retinal photoreceptors of the zebrafish nrc mutant. J Neurosci. 21, 2330-2330 (2001).
- Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R. OFF ganglion cells cannot drive the optokinetic reflex in zebrafish. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 19126-19126 (2007).
- Prober, D. A., Rihel, J., Onah, A. A. Hypocretin/orexin overexpression induces an insomnia-like phenotype in zebrafish. J Neurosci. 26, 13400-13400 (2006).
- Westerfield, M. . The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish. , (2000).
