طبقات ثنائية مستو المعتمدة هي أدوات قوية يمكن استخدامها في تصميم نموذج التفاعلات الجزيئية في المشبك المناعية. هنا ، وتبين لنا لترسيخ أساليب بروتينات التصاق الخلايا المعروفة لتعديل تشكيل المشبك إلى النشرة العلوي من bilyer الدهون ووضع تصور لتشكيل المشبك TIRF باستخدام المجهر.
Abstract
طبقات ثنائية مستو المعتمدة هي أدوات قوية يمكن استخدامها في تصميم نموذج التفاعلات الجزيئية في المشبك المناعية. لمحاكاة التفاعلات بين الخلايا الليمفاوية وخلايا مولدة عرض ، ونحن نستخدم Ni2 + – شيلاتينغ الدهون لترسيخ المؤتلف التصاق الخلايا والبروتينات MHC إلى النشرة العلوي من طبقة ثنائية مع بولي الحامض الاميني به. يتم إنشاء طبقات ثنائية مستو من خلال إعداد الدهون ، ومعالجة السطوح الزجاجية حيث ستشكل طبقة ثنائية ، وتشكيل طبقة ثنائية ثم في غرفة متخصصة تحتوي على تدفق الخلية حيث سيتم إضافة الخلايا الليمفاوية. وأضاف بعد ذلك ، واتهم طبقات ثنائية مع ني ونظيره الموسومة البروتينات المؤتلف. يمكن استخدامها أخيرا ، يتم حقن الخلايا الليمفاوية في الخلية وتدفق TIRF المجهري لتشكيل صورة المشبك والآليات التي تحكم تحرك الخلايا التائية ، ومواقع الفرز المستقبلة ، ومواقع للتدهور مستقبلات.
Protocol
1. إعداد الدهون من أجل ربط البروتينات إلى النشرة العلوي من طبقة ثنائية ، ونحن نستخدم ني 2 + الدهون مخلبية ، الذي ربط بروتينات المؤتلف مع بولي الحامض الاميني به. قد تلتزم بعض أنواع الخلايا غير خصيصا لطبقات ثنائية …
Vardhana, S., Dustin, M. Supported Planar Bilayers for the Formation of Study of Immunological Synapses and Kinapse. J. Vis. Exp. (19), e947, doi:10.3791/947 (2008).