समर्थित planar bilayers शक्तिशाली उपकरण है कि एक प्रतिरक्षाविज्ञानी synapse में आणविक मुलाकातों मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यहाँ, हम कोशिका आसंजन लिपिड bilyer के ऊपरी पत्रक synapse गठन मिलाना और synapse TIRF माइक्रोस्कोपी का उपयोग गठन कल्पना जाना जाता है प्रोटीन के प्रस्तोता के लिए तरीके दिखा.
Abstract
समर्थित planar bilayers शक्तिशाली उपकरण है कि एक प्रतिरक्षाविज्ञानी synapse में आणविक मुलाकातों मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. लिम्फोसाइटों और प्रतिजन कोशिकाओं के बीच बातचीत की नकल करने के लिए, हम Ni2 + chelating लिपिड का उपयोग करने के लिए पाली हिस्टडीन टैग के साथ एक bilayer के ऊपरी पत्रक के लिए पुनः संयोजक कोशिका आसंजन और MHC प्रोटीन लंगर. Planar bilayers लिपिड तैयारी, गिलास सतहों जहां bilayer फार्म का होगा इलाज, और फिर एक विशेष कक्ष में एक प्रवाह सेल जहां लिम्फोसाइटों जोड़ा जाएगा युक्त bilayer बनाने के द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं. फिर, bilayers नी और अपने टैग पुनः संयोजक प्रोटीन के साथ चार्ज किया जाता है जोड़ रहे हैं. अंत में, लिम्फोसाइटों प्रवाह सेल और TIRF माइक्रोस्कोपी में इंजेक्ट कर रहे हैं छवि synapse गठन और तंत्र के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि नियंत्रण टी सेल हरकत, रिसेप्टर छँटाई की साइटों, और रिसेप्टर गिरावट की साइटों.
Protocol
1. लिपिड तैयारी आदेश में प्रोटीन एक bilayer के ऊपरी पत्रक से लिंक करने के लिए, हम नी उपयोग 2 + chelating लिपिड, जो पाली हिस्टडीन टैग के साथ पुनः संयोजक प्रोटीन लंगर. कुछ सेल प्रकार के गैर – विशेष रूप से दो न?…
Vardhana, S., Dustin, M. Supported Planar Bilayers for the Formation of Study of Immunological Synapses and Kinapse. J. Vis. Exp. (19), e947, doi:10.3791/947 (2008).