免疫シナプスとKinapseの研究の形成のためのサポートされている平面二重層

Summary

サポートされている平面脂質二重層は、免疫学的シナプスの分子間相互作用をモデル化するために使用できる強力なツールです。ここで、我々は、脂質のbilyerの上部のリーフレットにシナプス形成を調節し、全反射顕微鏡を用いてシナプス形成を可視化するために知られている細胞接着タンパク質を固定するための方法を示しています。

Abstract

サポートされている平面脂質二重層は、免疫学的シナプスの分子間相互作用をモデル化するために使用できる強力なツールです。リンパ球と抗原提示細胞間の相互作用を模倣するために、我々は、ポリ – ヒスチジンタグを持つ二層の上部のリーフレットに組換え細胞接着およびMHCタンパク質を固定するNI2 +キレート脂質を使用してください。平面脂質二重層は、脂質の準備二重層が形成されるガラスの表面を処理し、リンパ球が追加されるフローセルを含む特殊なチャンバー内の二重層を形成することによって生成されます。その後、二層をNiで起訴され、Hisタグ融合組み換えタンパク質が追加されます。最後に、リンパ球は、フローセルに注入され、全反射顕微鏡は、画像のシナプス形成とメカニズム、その制御性T細胞の移動運動、受容体のソートのサイト、および受容体の劣化の部位に使用することができます。

Protocol

1。脂質の準備二重層の上部のリーフレットにタンパク質をリンクするために、我々は、Ni 2を使用してください+キレート脂質、ポリヒスチジンタグを持つアンカー組換えタンパク質を。特定の細胞型は、Ni 2 +でコーティングされた二重層へ非特異的に付着する可能性がありますが、T細胞は、一般的にT細胞活性化を研究するためのこの方法が最適なこ?…