Summary

면역 시냅스와 Kinapse 연구의 형성을위한 지원 평면 Bilayers

Published: September 15, 2008
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Summary

지원되는 평면 bilayers는 면역 버렸네에서 분자 상호 작용을 모델로 사용할 수있는 강력한 도구입니다. 여기, 우리는 지질 bilyer의 위쪽 전단지에 버렸네 형성을 조절하고 TIRF 현미경을 사용하여 버렸네 형성을 시각화하는 것으로 알려진 세포 부착 단백질을 고정하는 방법을 보여줍니다.

Abstract

지원되는 평면 bilayers는 면역 버렸네에서 분자 상호 작용을 모델로 사용할 수있는 강력한 도구입니다. lymphocytes와 항원 제시 세포 간의 상호 작용을 모방하기 위해, 우리는 폴리 – 히스티딘 태그 이중층의 위쪽 전단지에 재조합 세포 접착 및 MHC 단백질을 앵커로 Ni2 + – chelating의 lipids를 사용합니다. 평면 bilayers은 지방질을 준비 이중층이 형성 유리 표면을 처리하고, 다음 lymphocytes가 추가됩니다 흐름 세포를 포함하는 전문 챔버의 이중층을 형성하여 생성됩니다. 그런 다음, bilayers은 니켈과 그의 – 태그 재조합 단백질로 청구됩니다이 추가됩니다. 마지막으로, lymphocytes은 흐름 세포와 TIRF 현미경으로 주사는 이미지 버렸네 형성과 구조하는 데 사용할 수있는 제어하는​​ T 세포의 운동, 수용체 정렬의 사이트 및 수용체 저하의 사이트.

Protocol

1. lipids 준비 이중층의 상단에 전단지에 단백질을 연결하기 위해, 우리는 니켈 2를 사용 + 폴리 – 히스티딘 태그로 재조합 단백질을 고정 chelating의 lipids. 특정 세포 유형 니켈 2 + – 코팅 bilayers 이외의 특별히 준수지만, T – 세포는 일반적으로 T 세포 활성화를 공부하고이 방법이 최적 만들고하지 않습니다. 지질 이중층 솔루션은 20% 니켈 2 솔루션을 준?…
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Citer Cet Article
Vardhana, S., Dustin, M. Supported Planar Bilayers for the Formation of Study of Immunological Synapses and Kinapse. J. Vis. Exp. (19), e947, doi:10.3791/947 (2008).

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