Suportados Bicamadas Planar para a Formação do Estudo da Sinapses imunológicas e Kinapse

Summary

Suportados bicamadas planar são ferramentas poderosas que podem ser usados ​​para modelar as interações moleculares em uma sinapse imunológica. Aqui, vamos mostrar os métodos de ancoragem de proteínas de adesão celular que modula a formação de sinapses para o folheto superior do bilyer lipídico e visualize a formação de sinapses através de microscopia TIRF.

Abstract

Suportados bicamadas planar são ferramentas poderosas que podem ser usados ​​para modelar as interações moleculares em uma sinapse imunológica. Para simular as interações entre linfócitos e células apresentadoras de antígenos, usamos Ni2 +-quelante lipídios para ancorar adesão celular e proteínas recombinantes MHC o folheto superior de uma bicamada com poli-histidina tags. Bicamadas planas são gerados através da preparação de lipídios, o tratamento de superfícies de vidro, onde a bicamada formará, e então formar a bicamada em uma câmara especializada contendo uma célula de fluxo onde os linfócitos serão adicionados. Então, bicamadas são acusados ​​de Ni e sua marcadas proteínas recombinantes são adicionados. Finalmente, os linfócitos são injetados na célula de fluxo e microscopia TIRF pode ser usado para formação da imagem sinapse e os mecanismos que controlam a locomoção de células T, sites de classificação receptor, e os locais de degradação receptor.

Protocol

1. Preparar os lipídios A fim de ligar proteínas para o folheto superior de uma bicamada, usamos Ni 2 + lipídios quelante, que escora proteínas recombinantes com poli-histidina tags. Certos tipos de células podem aderir não especificamente para bicamadas + revestido Ni 2, mas as células T, geralmente, não, tornando este método ideal para estudar a ativação de células T. A solução bicamada lipídica é feita através da preparação de uma solução de Ni…