إعداد وصيانة الخلايا العصبية العقد الجذرية الظهرية في الثقافات Compartmented
Summary
نحن هنا وصف أسلوب إعداد وصيانة غرف compartmented عن خلايا عصبية حسية للزراعة العقد الجذرية الظهرية.
Abstract
الخلايا العصبية توسيع عمليات محواري التي هي بعيدة كل البعد من خلايا الجسم ليعصب الأنسجة المستهدفة ، حيث هناك حاجة الهدف المستمدة من عوامل نمو الخلايا العصبية من أجل البقاء والوظيفة. مطلوبة على وجه التحديد Neurotrophins للحفاظ على البقاء والتفريق بين الخلايا العصبية الحسية التعصيب ولكن مسألة كيف يمكن لهذه neurotrophins الهدف المستمدة من التواصل لخلايا الجسم من الخلايا العصبية التعصيب كان مجال للبحث نشطة لأكثر من 30 عاما. النموذج الأكثر شيوعا عن كيفية قبول اشارات neurotrophin تصل إلى خلايا الجسم يقترح أن يشير الإندوسومات تحمل هذه الإشارة retrogradely على طول محور عصبي. وكان من أجل دراسة النقل إلى الوراء ، وضعت أصلا لنظام الثقافة من خلال Campenot روبرت ، الذي يتم عزل أجسام الخلايا من المحاور الخاصة بهم. أسلوب إعداد هذه الدوائر compartmented لزراعة الخلايا العصبية الحسية يجمل تحفيز الانتقائي للمحطات التي تحدث في الخلايا العصبية بعد الافراج فيفو الهدف المستمدة neurotrophins. مما يشير إلى الوراء الأحداث التي تتطلب طويلة المدى تعتمد على النقل أنيبيب الوراء لها انعكاسات هامة لعلاج الاضطرابات العصبية.
Protocol
Discussion
في هذا الفيديو ، لقد أثبتنا كيفية إعداد وصيانة غرف compartmented لاستخدامها في زراعة الخلايا العصبية DRG. ذلك صحيح ، وهذا النظام يسمح الفصل بين خلايا الجسم من محور عصبي ، من أجل دراسة الآليات التي neurotrophins إشارة عبر محاور عصبية طويلة. لأنه ليس هناك عزلة fluidic بين المقصورات ، لأنها تتيح لتحف…
Acknowledgements
نود أن نشكر كاتارينا Cosker وCourchesne ستيفاني لإجراء مناقشات مفيدة.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
