隔间文化背根神经节神经元的制备及维修
Summary
在这里，我们描述培养的背根神经节感觉神经元的隔间钱伯斯编写和维护的技术。
Abstract
神经元的延伸，从细胞体拆下来支配靶组织，靶源性生长因子神经元的存活和功能的要求的轴突过程。神经营养因子具体要求，以维持生存和支配的感觉神经元的分化，但如何将这些目标源性神经营养因子的支配神经元细胞体沟通的问题已经超过30年的一个活跃的研究领域。神经营养因子的信号如何到达细胞体的最普遍接受的模型的建议，信令内涵体进行这个信号沿着轴突逆行。为了研究逆行运输，文化系统的最初设计由罗伯特Campenot，其中胞体从它们的轴突隔离。技术准备培养的感觉神经元概括选择性刺激神经元的终端发生以下靶源性神经营养因子在体内释放这些隔间商会。逆行信号的事件，需要长距离微管依赖逆行运输的神经退行性疾病的治疗具有重要意义。
Protocol
试剂的制备 胶原涂层 ：胶原蛋白外衣P35组织培养板，并放置在烤箱在37 ° C时2天前润滑的分隔。最后胶原蛋白的浓度应在0.71毫克/毫升0.001 ñ盐酸稀释。然后，添加1毫升每盘的混合物。 油脂装载机 ：为了填补油脂装载机，一个60ml的注射器必须先与康宁真空润滑脂填充。使用注射器填补油脂装载机，包装箔，然后高压灭菌45分钟。 聚四氟乙烯分隔的分频?…
Discussion
在这段视频中，我们已经演示了如何编写和维护用于培养DRG神经元的隔间商会。处理得当，这个系统可以从轴突细胞体内分离，以研究神经营养因子，其中跨长轴突信号机制。由于车厢之间的隔离流体，它允许没有受到影响的其他车厢选择性刺激或一室的治疗。隔间腔文化可以支持其他类型的细胞，包括从颈上神经节，视网膜神经节神经元和皮层神经元交感神经元。空间理解神经营养因子信号转导的神经退行性?…
Acknowledgements
我们想感谢卡塔琳娜Cosker和斯蒂芬妮Courchesne有益的讨论。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
Citer Cet Article
F. Pazyra-Murphy, M., A. Segal, R. Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures. J. Vis. Exp. (20), e951, doi:10.3791/951 (2008).