Kompartman Kültürleri Dorsal Kök Ganglia Nöronlar hazırlanması ve Bakım
Summary
Burada dorsal kök gangliyon kültür duyusal nöronlar için kompartman odaları hazırlanması ve bakımı tekniği açıklar.
Abstract
Nöronlar hedef kaynaklı büyüme faktörleri nöronal hayatta kalma ve işlevi için gerekli olan hedef dokular, çok innerve hücre gövdesi çıkarılır aksonal süreçleri uzatmak. Nörotrofinler özellikle duyusal nöronlar innerve hayatta ve farklılaşma korumak için gereklidir, ancak bu hedef elde edilen nörotrofinler innerve nöron hücre gövdesi nasıl iletişim soru, 30 yılı aşkın bir süredir aktif bir araştırma alanı olmuştur. Nörotrofin sinyalleri hücre gövdesinden nasıl ulaşacağını en yaygın kabul gören model, sinyalizasyon, akson boyunca retrograd bu sinyali taşımak endosomes önermektedir. Retrograd taşıma incelemek üzere, bir kültür sistemi, aslında hücre gövdeleri aksonlar izole edildiği Robert Campenot tarafından icat edildi. Kültür duyusal nöronlar özetlediği hedef kaynaklı nörotrofinler in vivo aşağıdaki sürümde oluşan nöron terminalleri seçici uyarılma için bu kompartman odaları hazırlama tekniği. Uzun menzilli mikrotübül bağımlı retrograd taşıma gerektiren Retrograd sinyalleme olaylarını nörodejeneratif hastalıkların tedavisi için önemli etkileri vardır.
Protocol
Discussion
Bu video, kompartman odaları kültür DRG nöronlar kullanmak için nasıl hazırlamak ve sürdürmek göstermiştir. Düzgün yapılmazsa, bu sistem hangi nörotrofinler uzun aksonlar boyunca sinyal mekanizmaları araştırmak için akson hücre gövdesinden ayrılması sağlar. Bölmeleri arasında akışkan izolasyon olmadığı için, diğer bölmeleri etkilenen olmadan bir kompartmanı seçici uyarılma veya tedavi için izin verir. Kompartman odasına kültürlerin üstün servikal ganglionlar, retina ganglion nöronlar, ve kortikal …
Acknowledgements
Biz, Katharina Cosker ve Stephanie Courchesne yararlı tartışmalar için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
