الضغط تلميع الماصات لتسجيل باتش تحسين المشبك
Summary
هذا هو دليل على تعديل شكل micropipettes الزجاج. على وجه التحديد ، وذلك باستخدام الحرارة والضغط الجوي وتوسيع تفتق دون زيادة افتتاح الطرف ، مما يؤدي إلى انخفاض المقاومة ماصة. هذا أمر بالغ الأهمية للحصول على تسجيلات ضوضاء منخفضة من خلايا صغيرة لكنها مفيدة في العديد من التطبيقات.
Abstract
الضغط التلميع وسيلة لتشكيل ماصات زجاجية للتسجيل التصحيح ، المشبك. نحن أول من طور هذه الطريقة لانتاج ماصات مناسبة للتسجيل من الصغيرة (<3 م) هيئات الخلية العصبية. الرئيسية الأساسية هي مشابهة لنفخ الزجاج ويجمع بين الضغط الجوي والحرارة لتعديل شكل ماصات التصحيح أعدها مجتذب micropipette التقليدية. ويمكن تطبيقه على ما يسمى لينة (صودا الجير) والثابت النظارات (البورسليكات). ويمكن عموما تلميع الضغط ، والحد من المقاومة ماصة بنسبة 25 ٪ ، دون التقليل من قطر لافتتاح غيض (غودمان وLockery ، 2000). ويمكن تطبيقه على أي نوع تقريبا من الزجاج ويتطلب سوى إضافة صمام الضغط العالي وتركيب لmicroforge. هذا الأسلوب هو ضروري لتسجيل من خلايا ultrasmall (<5 م) ويمكن أن تحسن أيضا على قناة واحدة تسجيل عن طريق تقليل مقاومة ماصة. الشكل السافر ما هو مفيد أيضا لتسجيل المشبك مثقوبة ، حيث أن هذه النتائج التصحيح شكل غيض في فقاعة أكبر ثقب غشاء متاح.
Protocol
Discussion
نحن وضعت أصلا لجعل هذه الطريقة مفيدة لماصات التصحيح ، المشبك تسجيل 2-3 ميكرومتر الخلايا العصبية في C. ايليجانس 1. هو في الاستخدام الروتيني في المختبر غودمان. ماصات ضغط تلميع نحن ليس فقط لتسجيل صغيرة من C. ايليجانس الخلايا العصبية ، ولكن أيضا من أجل الحصول على macropatch و?…
Acknowledgements
تم تطوير تقنية الضغط تلميع بالتعاون مع Lockery ريال.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glass Capillaries | Consumable | Sutter Instruments | BF150-85-10 (or similar) | The method works with any type of capillary except those made from quartz. However, we recommend using capillaries with a filament. |
| Inverted Microscope | Microscope | Leica | DM IL (or similar) | Any simple inverted microscope will do. However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing. We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose. |
| Microforge Kit | Tool | ALA Science | CPM-2 | Supplies polishing coil, controller and foot pedal. |
| Air pressure source | Tool | ALA Science | PR-60 | Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve. Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below) |
| 4-way valve | Tool | Cole-Parmer | A-98150-01 | Fittings will be needed to couple valve to tubing |
| Pipette Holder with Luer Connector | Tool | World Precision Instruments | MPH-6S20 | Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing |
| Tygon® tubing | Tool | Cole-Parmer | 06408-62 | Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve |
References
- Goodman, M. B., Lockery, S. R. Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. . J Neurosci Methods. 100, 13-15 (2000).
