培养大鼠颈上神经节（SCG）的交感神经元的议定书
Summary
这是一个描述如何分离并培养颈上神经节（SCG）的新生幼鼠的主要交感神经元的协议。
Abstract
颈上神经节（SCG）在大鼠小，有光泽，杏仁状结构，其中包含交感神经元。这些神经元提供的头部和颈部区域的交感神经支配，它们构成了一个良好的特点和人口相对同质化（4）。交感神经元是依赖于神经生长因子（NGF）的存活，分化和轴突生长和广泛的传播，神经生长因子的空房情况，有利于他们的文化和实验操作（2，3，6）。基于这些原因，培养的交感神经元，已被用于各种各样的研究，包括神经元的发育和分化，编程和病理细胞死亡的机制和信号转导（1，2，5，6）。解剖SCG从新生大鼠和培养交感神经元是不是很复杂，可以掌握相当迅速。在这篇文章中，我们将详细描述了如何剖析，从新生幼鼠在SCG并使用它们来建立培养的交感神经元。文章还将介绍预备步骤和各种试剂和实现这一目标所需要的设备。
Protocol
1。解剖的筹备工作： 选择适当的培养皿（10厘米或6孔板或24孔板等）取决于您的实验性质，和大衣与鼠尾胶原24小时前清扫。准备鼠尾胶原蛋白，并用它来大衣培养皿的方法已在别处（1）。 准备0.25％胰蛋白酶溶液中的磷酸缓冲液（PBS）（无EDTA）和过滤消毒。准备1毫升分装和存储-20℃ 准备一个解决方案包含在蒸馏水/去离子H 2 O 2.5毫米尿苷和5 – FDU过滤消毒，并准备50…
Discussion
我们用我们的文化SD大鼠。
需要时间和护理，清洗时的神经节。取出所有碎片，血管和脂肪。在确保文化，是多还是少均匀，无多余的细胞类型，这一步很重要。 uridine/5-FDU此外，将在很大程度上消除污染的文化任何剩余的非神经细胞（有丝分裂），或至少抑制其增殖。
此外，在解离步骤，耐心，花时间来单独的神经元，使他们没有发现在大的团块，一旦被接种到板块。大团块细胞不会产生良好的实?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
新西兰想感谢她的实验室成员Subhas比斯瓦斯，安德鲁Sproul，和瑞安威利特培训，在解剖和收获交感神经元。由NIH – NINDS赠款支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps, Stainless steel #5 | Tool | Roboz | RS4976 | |
| Scissors, DEAVER straight sharp-blunt- 43mm blades – 5.5 | Tool | Roboz | RS6760 | |
| RPMI 1640 w/ L-Glutamin | Reagent | Cellgro, Mediatech, Inc. | 10-040-CV | |
| Fetal Bovine Serum | Reagent | SAFC Biosciences | 12103c | |
| Donor Horse Serum | Reagent | JRH Biosciences | 12449 | Heat-inactivate by incubating in 56°C waterbath for 30 minutes. |
| Penicillin/streptomycin | Reagent | Gibco, Invitrogen | 15140-122 | |
| Trypsin without EDTA | Reagent | Difco | MT 25-050-CI | |
| Uridine | Reagent | Sigma | U3003 | |
| 5-Fluoro-5′ deoxyuridine | Reagent | Sigma | F-8791 | |
| NGF | Reagent | Harlan Bioproduct | BT-5025 | |
| Dissection Microscope and light source | Microscope | |||
| 15 ml polypropylene tubes | Tool | BD Falcon | 352096 | |
| Cell culture dishes | Tool | Corning, Nunclone |
References
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Citer Cet Article
Zareen, N., Greene, L. A. Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG). J. Vis. Exp. (23), e988, doi:10.3791/988 (2009).