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S. cerevisiaeの定量的プロテオミクスとタンパク質の複合体の同定
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Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae
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S. cerevisiaeの定量的プロテオミクスとタンパク質の複合体の同定

DOI:
10.3791/1225-v

•

11:12 min

•

March 04, 2009

•

, ,
1Department of Cellular and Physiological Sciences,University of British Columbia – UBC, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of British Columbia – UBC

Chapitres

  • 00:00Titre
  • 00:45Introduction
  • 01:17Preparation of the Bait and SILAC Control Strain
  • 02:44Grinding of Cells
  • 04:05Pre-clearing Cell Lysate
  • 05:51Eluting From IgG Beads by TEV Protease Cleavage
  • 06:45Trichloroacetic Acid (TCA) Precipitation
  • 08:11EtOH/ Acetate Precipitation
  • 09:00Sample Analysis by Western Blotting and/ or Silver Staining
  • 09:30Representative Results/ Outcome
  • 10:15Conclusion

Summary

Traduction automatique

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ここでは、出芽酵母でのタンパク質複合体を識別するための新しい定量的プロテオミクスの手法を説明します。本研究では、我々は、高い特異性でERタンパク質、Scs2pの結合パートナーを同定するためにタンデム質量分析が続くアフィニティー精製と一緒にSILACメソッドを使用している。

Tags

Protein ComplexesQuantitative ProteomicsS. CerevisiaeLipidsCellular MembranesCompartmentalizationIntracellular Signaling MoleculesNonvesicular RoutesMembrane Contact Sites (MCSs)Endoplasmic Reticulum (ER)Plasma Membrane (PM)Lipid-synthesizing EnzymesLipid TrafficER-PM MCSsYeast ModelEukaryotesScs2pMolecular PartnersGel ElectrophoresisIn-gel DigestionMass Spectrometry

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