Name: Görüntüleme Uyuşmazlığı DNA Hasar Onarım ve Hücresel Yanıtları Bacillus subtilis /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-08T17:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: Öğrenin, Bacillus subtilis hücrelerinde DNA tamir komplekslerinin gerçek zamanlı oluşumunu GFP füzyon proteinleriyle görüntüleme yöntemini. Bu protokol canlı hücrelerde uyumsuzluk tamir dinamiklerini incelemek için güvenilir bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Dr teşekkür etmek istiyorum. Başlangıçta floresan mikroskopi LAS eğitim için Philina S. Lee ve Alan D. Grossman. Yazarlar ayrıca teşekkür Dr. Yardım ve ipuçları görüntüleme için Melanie Berkmen ve Hajime Kobayashi. Bu çalışma, Edebiyat, Fen-Edebiyat Fakültesi ve Michigan Üniversitesi, Moleküler, Hücresel ve Gelişimsel Biyoloji Bölümü start-up fonları tarafından desteklenen oldu.

Mikroskopi için hücrelerin Büyüyen kültürlerin 1. Bir veya iki gün önce görüntüleme, B. hazırlamak subtilis görselleştirmek için istediğiniz translasyonel füzyon proteini içeren süzün. Adımları 1A ve 1B Deneme turlarında, büyüme durumu suşu en iyi görüntüyü sağlayan belirlemek için gerekli olacaktır. Çoğu durumda, hücreler, üstel büyüme aşamasında görüntülü olmalıdır. <ol class="ualpha"><li> Bazı B. subtilis suşları (endojen lokustaki ilgi ve GFP geninin arasında translasyonel füzyon entegrasyonu nedeniyle yetersiz büyümeye, özellikle suşları), görüntüleme için iki gün önce ilk büyüme, yüksek kaliteli görüntüler için gerekli . Ilk gününde, çizgi B. subtilis seçici antibiyotik (ler) ile LB agar yansıması zorlanma ve 30 ° C'de bir gece inkübe Ikinci gününde, tek bir koloni ile 100 ul 0.85% serum fizyolojik aşılamak ve 30 gece inkübasyon tarafından her seyreltme 100 mcL kaplama LB agar plakaları üç 10 kat seri dilüsyonları (seçici antibiyotikler ile), ° C gerçekleştirmek Üçüncü gününde, hücrelerin ışık konfluent büyüme ile seyreltme plaka seçin. Bir tabak Işık konfluent büyüme potansiyel (adım 4) mükemmel görüntüleme sonuçlar, katlanarak büyüyen sağlıklı bir başlangıç ​​inokulum ile büyüme ortamı sağlayacaktır. Bu adım, leke FM4-64 ile en yüksek kaliteli membran görüntüleme için yararlıdır. </li><li> B. Diğer subtilis suşları sadece steril bir çubuk görüntüleme için önceki gün ile tek koloniler için seçici LB agar uygulanacak ve 30 ° C'de bir gece inkübe Ertesi gün, bu plaka üzerinde hücreler (adım 4) görüntüleme için bir inokulum olarak kullanmak yeterli olacaktır. NOT: B. subtilis, sıvı bir ortamda geceleme kültürleri 1 lag fazı büyüme bir süre neden spor oluşumu ve yeter tepkiler, bir kombinasyonu nedeniyle uygun değildir. </li></ol> 2. Görüntüleme, yerine 10 ml, 125 ml steril Erlenmeyer şişesinin içine S7 50 1-3 orta sabahı . 3. Inokulum elde etmek için tek koloniler veya ışık konfluent hücreleri LB agar plaka S7 50 orta 2 ml kadar hücrelerin yeniden süspanse edin. 4. ~ 0.08 0.1 ila 600 nm dalga boyunda ölçülen bir ilk optik yoğunluk (OD 600) ile 10 ml S7 50 orta bir kültür içeren Erlenmeyer şişesi yeterli S7 50 orta hücre inokulum ekleyin. Bu aşamada, en az 10 kat hava orta oranı olması önemlidir. Böylece, 10 - 12.5 ml 125 ml Erlenmeyer şişesinin inoküle orta kullanın. 5. Kültür OD 600 ~ ulaşır 0.5-0.8 ° C ye kadar her 30 kültür büyütün. Çalkalamalı su banyosu, 150-200 dakikada devrimlerle tercih edilmektedir. DNA'nın zarar veya uyumsuzluğu indükleyici ajanlar ile meydan Kültürler erken bir üstel büyüme aşamasında olmalıdır OD 600 hücrelerin (bkz. Tablo 1), tedavi için gerekli olan büyüme ek süre ile OD 600 hedefe ulaşmak olacağını , Örneğin, 2-aminopurine bir tedavi saat, 2 aminopurine ile tedavi edilen bir kültür ve bu nedenle tedavi bir OD 600 / büyüme sonuçlar bir saat ~ 0.5-0.8 gibi, OD 600 ~ 0.3-0.4 olmalıdır gerektirir. sayede hücreleri görüntüleme için hazır. Numune Hazırlama 1. Pipet, 1.5 mL mikrosantrifüj tüpe kültür hücreleri 300 ul. 2. Hücre zarının görüntüleme isteniyorsa, 1 mg / ml stok solüsyonu leke FM4-64 membran (Invitrogen) her numune için 1:1000 dilüsyon ekleyin. FM4-64 A titrasyon istenen floresan sinyal elde etmek için gerekli olabilir. Tipik bir titrasyon aralığı, 1:100, 1:1000 ve 1:10,000. 3. Örnekleri, aşağıda açıklandığı gibi slayt 1X Spizizens orta% 1 agaroz ile hazırlanmakta olan ise, on dakika kadar veya oda sıcaklığında oturmak (bkz: adım 1 "slayt hazırlama") izin verin. 4. Hücre konsantrasyonu gerekiyorsa, biz, bir vakum cihazı ile filtre 0.2 mikron kullanarak filtreleme hücreleri tercih ediyor. Hücreler daha sonra PBS, uygun başka bir tampon veya görselleştirme önce orta filtre yüzeyinden nazikçe yıkanabilir. Slayt hazırlanması 1. 1X Spizizens% 1 agaroz hazırlayın. 5 ile 0.5 g agaroz ile birlikte 10X Spizizens stok ml 45 ml ddH2O ve eritmek için mikrodalga ekleyin. Sıcak erimiş agaroz pipetle zor ve agaroz pipet girmez pekiştirdi. Agaroz ° C pipet girmek için içinde katılaşabilme olmadan, bir sıcaklık 55-65 ~, bir su banyosu içinde dengelenmiş olmalıdır ucu. 2. % 1 erimiş agaroz Spizizens 20 ul pipet içine çizin. Agaroz çözüm sığ agaroz pedleri oluşturmak için her slayt (15 iyi slaytlar, bkz. Tablo 2) tek bir damla (yaklaşık 1-2 mcL) Pipet. Agaroz hemen pekiştireceğiz. Slaytlar da hücrelerin uygulamaya hemen önce yapılmalıdır. Agaroz pedleri sadece oda sıcaklığında bırakılırsa, onlar birkaç dakika içinde kurutmak ve kullanılamaz hale gelebilir. Agaroz pedleri merkezli ve her doldurmak iyi ama lamel bozmamak için en az yüksekliğe sahip olmalıdır; damlacıkları (baloncuk) gibi çok yüksek ya da örnek de sınır ötesine yayılır, sadece tokatlamak bir Kimwipe iyi temiz ve uygulamak Yeni agaroz ped. 3. Her agaroz pad üstüne dağıtılan slayt, tüm 300 ul örneği (bkz. adım 6) uygulayın. Bu hücre miktarı slaytta her iyi karşılamak için yeterli olmalıdır. 4. Yaklaşık on dakika boyunca oda sıcaklığında (23 ° C) oturup hücreleri yüklü slayt izin verin. Bu adım, agaroz ped hareketsiz görüntüleme için ve hazır olma niyet hücreler için izin verecektir. Bir sıcaklık değişimi 4 gerektiren deneyler yaparken, özel ihtiyaçları için bu sıcaklık, örneğin, değiştirilmesi gerekebilir . 5. Pedleri kendileri çıkarmadan her kuyudan fazla orta aspire edin. 6. Slayt alanı boyunca, yavaşça ve eşit sıkıca basarak, ancak, slayt lamel uygulayın. Kapak kayma, slayt karşı ve kapak kayma slayt üzerinde yükseltilmiş değildir olduğundan emin olmak için kontrol edin. Hücre Görselleştirme 1. Birçok farklı floresans mikroskopları iyi çalışacaktır. 100X immersiyon yağı lens için kritik öneme sahiptir. Simmons Lab kullanır: <ul><li> Olympus BX61 mikroskop 1,45 NA TIRFM 100X immersiyon yağı objektif lens ile donatılmış </li><li> Hamamatsu ORCAR 2 CCD kamera soğutmalı </li><li> Lümen 200 ark metal (Önceki) ışık kaynağı. </li><li> GFP (FITC), filtre uyarma 460-500 ve 510-560 emisyon tespiti için </li><li> FM4-64 (TRITC), filtre, uyarma 510-560 ve emisyon 572-648 tespiti için. </li><li> Görüntüler SlideBook 4.2 (Şekil 1) kullanarak ele geçirildi </li></ul> 2. Hücreleri, beyaz ışık kullanarak odak noktası haline getirin. 3. Her fluorofor için uygun filtreleri kullanarak görüntü yakalayın. Temsilcisi Sonuçlar Temsilcisi görüntüleri (Şekil 1). FM4-64 boyama 4-7 parlak ve net olmalıdır GFP odakları, iyi tanımlanmış olmalıdır. GFP veya membran görüntüleri herhangi bir veri kaybı olmadan sunulacak en yüksek kalitede görüntü için izin vermek için herhangi bir renk ile sözde renkli olabilir. <img src="/files/ftp_upload/1736/1736fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: B. Temsilcisi GFP görüntüleri FM4-64 membran boyanması kırmızı ile gösterilen ise subtilis translasyonel füzyon proteinleri GFP proteinler, yeşil gösterilmiştir. Beyaz ölçek çubuğu 3 mikron gösterir (A) bisiklet, GFP ilgili genotip: bisiklet, GFP (spc), amyE: Pspac mutL (kedi)] 600 mg / ml 2-aminopurine ve 1 mM IPTG varlığı. FM4-64 sinyal bisiklet, GFP odakları daha net bir şekilde göstermek amacıyla sunulan değildir (B) MutL GFP [ilgili genotip: mutL: mutL-GFP (spc)]. 2-aminopurine varlığı (C) DnaX-GFP [ilgili genotip: dnaX: dnaX-GFP (spc)]. (D) reca-GFP ilgili genotip: Reca: reca-GFP (spc)] varlığı 20 ng / ml mitomisin C (E) TagC-GFP [ilgili genotip: tagC: tagC-GFP (spc) 1 mcg / ml mitomisin C varlığı] <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> Tedavi / konsantrasyon veya miktarı </td><td> Fonksiyon </td><td> Inkübasyon süresi </td></tr><tr><td> Mitomisin C (MMC) [20 - 150 ng / ml] </td><td> DNA ajan alkilleyici </td><td> 1 saat </td></tr><tr><td> 2-aminopurine (2-AP) [600 mg / ml] </td><td> uyumsuzluğu indükleyici </td><td> 1 saat </td></tr><tr><td> Hidroksiüre (HU) </td><td> dNTP tüketir </td><td> 3 saat </td></tr><tr><td> ultraviyole ışınları (UV) 20 J/m2 </td><td> Timin-timin dimerleri ve 6-4 photoproducts </td><td> 20 saniye, genellikle kaynağına bağlı olarak değişir. </td></tr><tr><td> griler (iyonizan radyasyon) 5 100 Gy </td><td> Çift iplikli sonları, tek zincirinde kırılmalara ve baz hasarı siteleri </td><td> kaynağına bağlı olarak değişir. </td></tr></tbody></table>"DNA&gt; Tablo 1 Özet zarar ve uyumsuzluğu indükleyici tedavileri <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> Reaktifin Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Multi slayt, 15-iyi </td><td> MP Biyomedikal </td><td> 6041505E </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop Kapak Camlar </td><td> Balıkçı </td><td> 12-544-B </td><td></td></tr><tr><td> Agaroz </td><td> Balıkçı </td><td> BP160-500 </td><td></td></tr><tr><td> Mitomisin C </td><td> Sigma </td><td> M0503-2MG </td><td> mutagen, eldiven </td></tr><tr><td> 2-Aminopurine </td><td> Sigma </td><td> A3509-250mg </td><td> eldiven </td></tr><tr><td> Hidroksiüre </td><td> Sigma </td><td> H8627-25G </td><td> eldiven </td></tr><tr><td> FM4-64 </td><td> Invitrogen </td><td> T13320 </td><td> ışığa karşı hassastır </td></tr></tbody></table> Tablo 2. Özel reaktifler ve ekipman listesi:

<ol><li>Hardwood, C. R., Cutting, S. M. Molecular Biological Methods for Bacillus. , John Wiley and Sons. Chichester. (1990).</li>
<li>Berkmen, M. B., Grossman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+organization+of+the+Bacillus+subtilis+replication+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal organization of the Bacillus subtilis replication cycle.</a> Mol. Microbiol. 62, 57-71 (2006).</li>
<li>Simmons, L. A., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clp+and+Lon+proteases+occupy+distinct+subcellular+positions+in+Bacillus+subtilis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Clp and Lon proteases occupy distinct subcellular positions in Bacillus subtilis.</a> J. Bacteriol. 190, 6758-6768 (2008).</li>
<li>Simmons, L. A., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+is+required+for+the+RecA+localization+response+to+DNA+damage+in+Bacillus+subtilis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Replication is required for the RecA localization response to DNA damage in Bacillus subtilis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 104, 1360-1365 (2007).</li>
<li>Simmons, L. A., Davies, B. W., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((b+Clamp+Directs+Localization+of+Mismatch+Repair+in+Bacillus+subtilis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">b Clamp Directs Localization of Mismatch Repair in Bacillus subtilis.</a> Mol. Cell. 29, 291-301 (2008).</li>
<li>Simmons, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+responses+to+double-strand+breaks+between+Escherichia+coli+and+Bacillus+subtilis+reveals+different+requirements+for+SOS+induction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Comparison of responses to double-strand breaks between Escherichia coli and Bacillus subtilis reveals different requirements for SOS induction.</a> J. Bacteriol. 191, 1152-1161 (2009).</li>
<li>Smith, B. T., Grossman, A. D., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+mismatch+repair+in+bacterial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Visualization of mismatch repair in bacterial cells.</a> Mol. Cell. 8, 1197-1206 (2001).</li>
</ol>

Deneme ve yanılma her suşu için yüksek kaliteli görüntüler için maruz kalma koşullarını bulmak için gereklidir; 100 2000 ms pozlama GFP (FITC) ve FM4-64 için uygun iken, 1 milisaniye beyaz ışık görüntüler için uygun olduğunu bulmak (TRITC ) görüntüleri. Pozlama süresi kullanılan görüntüleme cihazları bağlı olarak değişecektir. Biz, aynı slaytta birden fazla suşları mevcuttur ped ped sınır hücrelerinin kalite ve difüzyon gerginlik farklılaşma karmaşık hale getirebilir basit görüntüleme için 15 kuyu mikroskop lamı başına ...

Özel çözüm tarifleri: 1 10x S7 50 tuzları 0,5 M MOPS 100 mM Amonyum Sülfat 50 mM potasyum fosfat mono Sterilize Filtresi ve depolama önce sarın S7 folyo ile 50 medya 100x Metaller 0.2 M MgCl 2 70 mM CaCl 2 5 mM MnCl 2 0.1 mM ZnCl 2 100 mcg / mL Tiamin HCl 2 mM HCl 0.5 mM FeCl 3 * dH 2 O son hacim * FeCl 3 yağış önlemek için, son ilave edilmelidir. Filtre Sterilizasyon sonrasında, folyo sarın 100x Metal çözüm. S7 50 medya 1x S7 50 tuzları 1x Metal 1% Glikoz 0.1% Glutamat 40 mcg / ml Triptofan 40 mcg / ml Fenilalanin H 2 O son hacim distile 10x Spizizens (gram / ​​L) 151.4 mM Amonyum Sülfat (20g / L) 803,8 mM potasyum fosfat mono (140g / L) 440,9 mM potasyum fosfat dibazik (60g / L) 34,0 mM Sodyum Sitrat (10g / L) 16.6 mM MgSO 4 (2 g / L) dH 2 O son hacim Sterilize filtreleme

görüntüleme uyuşmazlığı dna hasar onarım ve hücresel yanıtları bacillus subtilis</em

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

Hem prokaryot ve ökaryotlarda DNA hasarı karmaşık bir dizi fizyolojik değişiklikler ile yanıt verir. Gen ekspresyonu, mevcut proteinlerin yeniden dağıtımı ve yeni protein kompleksleri montaj değişiklikler DNA lezyonları ve eşleşmeyen DNA baz çifti çeşitli teşvik edilebilir. Floresan mikroskopi DNA lezyonları ve karmaşık hücre içi mimari canlı bir hücre içinde DNA replikasyon durumunu izlemek için bu ve diğer tepkiler görselleştirilmesi ve ölçülmesi için güçlü bir deney aracı olarak kullanılmıştır. , Floresan muhabiri proteinleri ve DNA replikasyonu ve tamiri makine bileşenleri arasında Translasyonel füzyonlar ipuçlarını belirlemek için kullanılan hedef DNA onarım proteinleri cognate lezyonlar<em&gt; In vivo</em&gt; Ve bu proteinlerin bakteri hücrelerinin içinde nasıl organize edilir, anlamak için. Buna ek olarak, DNA hasarı indüklenebilir sahiplerine bağlanan transkripsiyonel ve translasyonel füzyonlar nüfus içinde hücre genotoksik stres yanıtları aktif olduğunuz ortaya koymuştur. Bu derlemede, floresan mikroskobu kullanarak görüntü, DNA onarım ve tek bir bakteri hücrelerinin DNA replikasyonu kompleksleri montaj için detaylı bir protokol sağlar. Özellikle, bu çalışmanın görüntüleme uyumsuzluğu onarım proteinler, homolog rekombinasyon, DNA replikasyonu ve SOS-indüklenebilir bir protein üzerinde duruluyor<em&gt; Bacillus subtilis</em&gt;. Burada açıklanan tüm prosedürler bakteri türlerinin çeşitli görüntüleme protein kompleksleri kolayca mükellef bulunmaktadır.

Ayrıntılı bir protokol görüntüleme için DNA onarım komplekslerin gerçek zamanlı oluşumu açıklanmıştır<em&gt; Bacillus subtilis</em&gt; Hücreler.

Görüntüleme Uyuşmazlığı DNA Hasar Onarım ve Hücresel Yanıtları Bacillus subtilis</em

Hem prokaryotlar hem de ökaryotlar, karmaşık bir fizyolojik değişimler seti aracılığıyla DNA hasarına yanıt verirler. Gen ekspresyonundaki değişiklikler, yeniden dağılım...

Hatalı eşleşme onarımı proteinlerinin translasyonel füzyonlarını taşıyan Baus TLU suşları. GFP ile füzyonlanmış proteinler seçici besiyerine ekilir. İzole edilen hücreler, sıvı kültüre taze inokülüm olarak kullanılır.Hücreler, OD 600 değeri 0,3 ile 0,4 arasına ulaşana kadar büyütülür; bu noktada istenirse uyumsuzluk indükleyici işlemler uygulanır ve hücreler OD 600 değeri 0,5 ile 0,8 arasına ulaşana kadar büyütülmeye devam edilerek toplanır. İstenirse membran boyası FM 4 64 eklenir ve hücreler, hazırlanmış agar pedleri bulunan lamlara uygulanır; fazla besiyeri aspirasyon yoluyla uzaklaştırıldıktan sonra hücrelerin çökmesi beklenir.Bir lamel kapatılır ve hücreler mikroskopi ile görüntülenir. Merhaba, ben Michigan Üniversitesi Ann Arbor, Moleküler, Hücresel ve Gelişimsel Biyoloji Bölümü'nde Dr. Lyle Simmons'ın laboratuvarından Dr. Andrew Kow. Bugün size, bacillus solus'ta DNA uyumsuzluk onarım proteinlerinin yanı sıra diğer onarım ve ribozomal proteinlerin translasyonel füzyonlarını görüntülemek için kullanılan bir prosedürü göstereceğiz.Bu prosedürü, Bacillus subtilis canlı hücrelerindeki DNA uyumsuzluk onarım proteinleri ile ribozomal proteinler arasındaki etkileşimi incelemek için

imaging-mismatch-repair-cellular-responses-to-dna-damage-bacillus

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz, iki boyutlu agaroz-jel analizi, UV ışını meydana çoğaltma ara yapısını tanımlamak için kullanılır olabilir bir prosedür sunuyoruz.

UV ile indüklenen Çoğaltma Ara Görselleştirme E. coli İki boyutlu agaroz-jel Analizi

Elektron spektroskopik görüntüleme, nükleik asidi proteinden nanometre çözünürlükte görüntüleyebilir ve ayırt edebilir. Transmisyon elektron mikroskobu örneklerinde etiketli proteinleri özel olarak etiketleyebilen miniSOG sistemi ile birleştirilebilir. Örnek olarak çift iplikli kopma onarım odaklarını kullanarak bu teknolojilerin kullanımını gösteriyoruz.

Elektron Spektroskopik Görüntüleme Kombinasyonunun miniSOG Etiketli DNA Onarım Proteinler Görselleştirme (ESI)

Bu protokol lazer microirradiation DNA hasar, nispeten basit kırılmalara ve DNA hasar sinyal ve onarım faktör montaj hasar sitelerde içinde vivo çalışmaya karmaşık hasarı gibi farklı türde ikna etmek için nasıl kullanılacağını açıklamak için hedeftir .

Vivo hücresel yanıt-e doğru basit ve karmaşık DNA hasarı incelemek için lazer Microirradiation

DNA hasar inducing ve DNA onarım proteinler seçili alt nükleer alanlarda yanıt izlemek confocal floresan mikroskopi ve lazer mikro-ışınlama teklif araçları. Bu teknik, hasar tespiti, sinyal ve işe alım ile ilgili bilgilerimizi önemli ölçüde ilerlemiştir. Bu el yazması tek ve Çift Kişilik strand sonu onarım incelemek için bu teknolojilerin gösterir.

Lazer mikro-ile kullanma için tek incelenmesi ve çift Strand Break onarım memeli hücrelerinde

Çift iplikli kırılmalara DNA tamiri lezyon ele sonra sadece onarım kompleksleri, tatili, aynı zamanda onların çözünürlük oluşumu gerektiren dinamik bir süreçtir. Burada, ayirt mikroskobu geçici ve uzun ömürlü çift iplikçikli tatili için bir araç olarak bu genom bakım mekanizma incelemek için kullanırız.

DNA onarım işlemleri, Darbe Gerilimlerinden ve uzun süreli iki iplikçikli DNA sonları ayirt mikroskobu ile karakterize

Bor nötron yakalama terapisinde (BNCT) kullanılan nötron karışık ışınıile aktive edilen radyasyona bağlı DNA hasar tepkisi tam olarak belirlenmemiştir. Bu protokol, nötron-karışık ışın ile ışınlama sonra insan kolon kanseri hücre hatlarında immünofloresan boyama tarafından onarım proteinlerinin radyasyonkaynaklı foci (RIF) tespit etmek için adım adım bir prosedür sağlar.

İnsan Kolon Kanseri Hücrelerinde DNA Hasarı ve Onarım Foci İmmünofloresan Görüntüleme

DNA hasarının ardından, insan hücreleri genomlarının bütünlüğünü geri yüklemek için gerekli onarım yollarını aktive ederler. Burada, dolaylı immünoffloresan yöntemini DNA onarım proteinlerini tespit etmek, mekansal ve zamansal işe alımlarını analiz etmek ve DNA hasarı nın olduğu yerlerde protein-protein etkileşimini sorgulamaya yardımcı olmak için bir araç olarak tanımlıyoruz.

DNA Onarım Proteinlerinin İmmünfluoresan Etkileşiminin Görselleştirilmesi

Bu makalede immünostaining ve kromatin immünödeksiasyonunun temel adımları tanıtılmaktadır. Bu protokoller genellikle DNA hasarına bağlı hücresel süreçleri incelemek ve DNA onarımına karışan proteinlerin alımını görselleştirmek ve ölçmek için kullanılır.

Endononülaz Bazlı Meydana Özgü DNA Hasarlarını Görselleştirme ve Ölçme

Bu protokol, DNA hasarının yanı sıra, mitoz sırasında lokalizasyonu cevap olarak aktive bir çift iplikli DNA mola sinyal protein görüntülenmesi için bir yöntem açıklanır.

DNA Hasarı Tepki Proteinler İki ve Üç Boyutlu Canlı Hücre Görüntüleme

Rasyometrik bimoleküler işaretleri (RBMBs) canlı hücreler görüntü tek bir mühendislik RNA transkriptleri için kullanılabilir. Burada, RBMBs, mikroporasyonu ve gerçek zamanlı olarak tek RNA transkriptlerinin floresan görüntüleme hücrelere RBMBs teslimat hazırlanmasını ve saflaştırılmasını tanımlarlar.

Oranlı metrik Bimoleküler Fenerleri kullanma Yaşam Hücrelerde Tek Engineered RNA Transkriptlerinin Gerçek zamanlı Görüntüleme

Öğrenin, Bacillus subtilis hücrelerinde DNA tamir komplekslerinin gerçek zamanlı oluşumunu GFP füzyon proteinleriyle görüntüleme yöntemini. Bu protokol canlı hücrelerde uyumsuzluk tamir dinamiklerini incelemek için güvenilir bir çerçeve sunar.

Görüntüleme Uyuşmazlığı DNA Hasar Onarım ve Hücresel Yanıtları Bacillus subtilis

Daha fazla video keşfet