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Chapitres
- 00:00Titre
- 01:38Introduction
- 02:30Experimental Design
- 03:58Immobilization of the Ligand Papain for CFCA Analysis
- 07:34Determining Cystatin B Concentration Using the CFCA Assay
- 11:07Measuring the Kinetics of Cystatin B binding to Papain
- 17:13CFCA assay and Kinetics of Cystatin B binding to Papain Representative Results
- 18:47Conclusion
Noi applichiamo un'etichetta priva di analisi di interazioni proteina utilizzando X100 Biacore per la struttura-funzione di analisi del legame di mutanti diversi cistatina B di papaina attraverso la caratterizzazione cinetica. Calibrazione senza analisi concentrazione (ACCP) misura la concentrazione di proteine con attività di legame mantenuto senza la necessità di una curva standard. Abbiamo dimostrato che la conferma delle concentrazioni utilizzando ACCP aumenta l'affidabilità delle analisi cinetica e che le costanti cinetiche possono essere affidabile anche se l'attività di una proteina ricombinante è ridotta.
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Protein ConcentrationKineticsAffinity DeterminationStructure-function AnalysisCysteine Protease InhibitorCystatin BPapainReal-time Label-free AnalysisBiacore X100Point MutationsInteractionCalibration-free Concentration Analysis (CFCA)A280Single-cycle Kinetics (SCK)Association Rate Constant (ka)Affinity (KD)Reliable ResultsInteraction Mechanism
