Sectioning رقيقة من الاستعدادات لشريحة المناعية
April 28th, 2007
الأسلوب الحالي يسمح ناظم البرد استنساخه sectioning قطعة صغيرة من الأنسجة ، ويصعب إدارتها ، مثل الخزعات وشرائح الدماغ. علينا الاستفادة من مرحلة التجميد الألومنيوم بسيطة لتسهيل التعامل مع الأنسجة وناظم البرد القياسية لانتاج المقاطع بشكل روتيني 5-10 ميكرون المسلسل من شرائح 400 ميكرون سميكة الدماغ.
مرحبا ، اسمي زميل جون بارك للأبحاث في كلية الطب بجامعة هارفارد وأنا أيضا طالب دكتوراه في الطب Y كلية الطب بجامعة مستشفى Severance ، EO Korea. هذه مواد للتقسيم الرقيق لمستحضرات الشرائح. أنا أقوم بإعداد قالب من الشريط الرابع منصة OCT.
أشعر بأنني مصبوب باستخدام OCT والتجميد داخل ناظم البرد أو باستخدام العيون الجافة المسحوقة ، أقوم بإزالة TAFE من حول منصة OCT المجمدة. أعرض علامات محاذاة على الطباشير المتجمد ومرحلة تركيب ناظم البرد وقفل الطباشير. أنا أقوم بالتقسيم من خلال منصة OCT.
سطح أونتاريو مسطح. أقوم بإزالة منصة OCT المعاد ظهورها ووضعها في مرحلة تجميد البرد. أضع هذه العينة في OCT وهذه العينة محفوظة مسبقا بالتبريد مع 30٪ جلسرين أو سكروز في PBS.
هذه هي الخطوة لإعداد عمود التجميد مع الحلقة الخارجية البارزة بحوالي خمسة ملليمترات فوق الجزء العلوي من تشكيل العمود. حسنا بالنسبة ل OCTI Am ، ضع عينة الأنسجة بعناية على مركز سطح العمود المتجمد وأضف OCT ببطء حتى تمتلئ البئر. أنا أحيط بعمود التجميد بعيون جافة محطقة.
يجب أن تتجمد الأنسجة و OCT تماما في غضون 20 إلى 60 ثانية. مع زيادة درجة حرارة التحضير ، يمكن إزالة الحلقة الخارجية بينما تظل العينة مجمدة. هذه هي الخطوة لتحريك عينة من عمود التجميد بشكل جانبي ووضعها في ناظم البرد.
أضع قطرة من OCT على سطح منصة OCT ووضع رائد الفضاء الذي يطبق ضغط الشكل سوف يتجمد بسرعة على منصة OCT. هذه هي الخطوة لتأمين ch On على مرحلة التركيب ناظم البرد مع محاذاة العلامات. أنا أقوم بتقسيم OCT السطحي لرائد الأنسجة.
أقوم برمي أقسام رقيقة على شرائح زجاجية وتخزين درجة حرارة الغرفة المجمدة أو الحمراء في التفاعلات التي يمكن إجراؤها للأنسجة المثبتة على شرائح زجاجية. يمكن سحب الكاشف على الشريحة بلطف ويمكن تغطيته إذا تم تنفيذ المراحل اللاحقة الحساسة للضوء بسهولة عن طريق القلب. انزلق في وعاء النفايات ، مما يؤدي إلى إضعاف الشريحة ، ثم تطبيق الإنشاء التالي.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
نظرة عامة
تُمكّن هذه الطريقة من تقسيم عينة الأنسجة الصغيرة والمعقدة بشكل قابل للتكرار باستخدام أداة التقسيم المجمدة. تستخدم مرحلة تجميد ألمنيوم بسيطة لتسهيل التعامل مع الأنسجة وجهاز تقسيم مجمد قياسي لإنتاج مقاطع متسلسلة بسمك 5-10 ميكرون من شرائح الدماغ بسمك 400 ميكرون.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- علم الأعصاب
- علم الأنسجة
- معالجة الأنسجة
الخلفية
- تقسيم عينة الأنسجة المجمدة ضروري لدراسة العينات الصغيرة.
- يمكن أن يكون التعامل مع خزعات صغيرة وشرائح الدماغ تحديًا تقنيًا.
- قد لا تنتج الطرق القياسية نتائج قابلة للتكرار.
- يمكن أن تعمل التقنيات المحسنة على تحسين جودة مقاطع الأنسجة.
هدف الدراسة
- لتطوير طريقة موثوقة لتقسيم عينات الأنسجة الصغيرة.
- تسهيل التعامل مع قطع الأنسجة التي يصعب التحكم فيها.
- لإنتاج مقاطع متسلسلة متسقة وعالية الجودة.
الطرق المستخدمة
- استخدام مرحلة تجميد من الألومنيوم.
- جهاز تقسيم مجمد قياسي لتقسيم العينات.
- إنتاج مقاطع بسمك 5-10 ميكرون.
- تحضير شرائح الدماغ بسمك 400 ميكرون.
النتائج الرئيسية
- تقسيم ناجح لعينات الأنسجة الصغيرة.
- تكرارية سمك المقاطع.
- تحسين التعامل مع أنواع الأنسجة المعقدة.
- إنتاج متسق للمقاطع المتسلسلة للتحليل.
الاستنتاجات
- تعزز هذه الطريقة القدرة على دراسة عينات الأنسجة الصغيرة.
- توفر طريقة موثوقة للباحثين في علم الأعصاب.
- قد تشمل التطبيقات المستقبلية أنواعًا مختلفة من تحليل الأنسجة.
