JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 2:09 min • April 30th, 2023
- Tout d’abord, placez une lame de microscope entre deux autres lames avec du ruban adhésif. Ceux-ci fournissent un support et des entretoises pour la préparation du tampon d’agarose. Ensuite, placez une goutte d’agarose fondue sur la lame. Appuyez immédiatement dessus avec une autre diapositive.
Une fois que l’agarose s’est solidifiée, séparez soigneusement les lames afin que l’agarose reste sur une lame. Utilisez toujours des coussinets fraîchement préparés, car des coussinets desséchés peuvent déshydrater les animaux. Assurez-vous qu’il n’y a pas de fissures ou de bulles, qui pourraient perturber l’intégrité du tampon.
Ensuite, ajoutez une goutte d’anesthésique au centre du tampon et transférez-y 10 à 15 animaux, en apportant le moins de bactéries possible avec eux. Un excès de bactéries pourrait interférer avec l’imagerie. Si la solution anesthésique sèche, ajoutez une deuxième goutte sur les animaux.
Placez délicatement une lamelle sur le tampon. Évitez de former des bulles ou d’exercer une pression trop forte sur celui-ci pour éviter d’endommager les animaux. Enfin, étiquetez la lame, qui est prête pour l’imagerie.
- Commencez par préparer les lames pour l’imagerie. Placez une goutte d’agarose fondue sur une lame de microscope et appuyez immédiatement sur la gouttelette avec une autre lame de microscope en aplatissant doucement l’agarose Besoin que l’agarose sèche pendant une minute.
Ensuite, séparez soigneusement les deux lames et laissez le tampon solidifié sur l’une des lames. Placez la lame sur la platine du microscope et ajoutez une goutte de 5 à 10 microlitres d’anesthésique au centre du tampon agras.
À l’aide d’un pic stérilisé à la chaleur, transférez rapidement 10 à 15 animaux de la plaque de stock à la gouttelette d’anesthésique avant que la solution ne sèche. Ensuite, appliquez une lamelle en la positionnant juste au-dessus du tampon d’agarose et en la déposant doucement.