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Recherche sur le cancer
0 vues • 2:42 min • April 30th, 2023
Les sphéroïdes cancéreux sont des agrégats cellulaires tridimensionnels de cellules tumorales. Ces sphéroïdes peuvent être intégrés dans la matrice de collagène, ce qui entraîne la formation de blocs sphéroïdes. Pour congeler instantanément un bloc sphéroïde, commencez par placer un bloc sphéroïde en gel de collagène au centre d’un moule histologique.
Rincez le bloc avec un tampon approprié et complétez le moule avec une solution fixatrice. Incuber pour permettre à cette solution de pénétrer dans les sphéroïdes et de réticuler les protéines cellulaires. Cette étape permet de maintenir la structure sphéroïde pour la procédure ultérieure. Ensuite, aspirez la solution fixatrice.
Placez le bloc de gel sphéroïde dans un moule d’histologie frais contenant une fine couche de milieu d’enrobage. Superposez-le avec plus de support d’enrobage pour immerger complètement le bloc sphéroïde. Enfin, plongez le moule dans un bain d’azote liquide pendant une courte durée.
La congélation rapide empêche la formation de cristaux de glace plus gros dans les sphéroïdes. Il aide à conserver l’intégrité des sphéroïdes sans causer de dommages mécaniques. Une fois que la couche de support d’enrobage se solidifie autour du bloc sphéroïde, retirez le bloc congelé du moule. Conservez le bloc de sphéroïdes congelé à basse température pour une analyse histologique plus approfondie.
Tout d’abord, utilisez de petites pinces pour soulever le bloc de gel de collagène et les sphéroïdes de la lame de chambre. Ensuite, placez le bloc de gel de collagène dans un moule d’histologie en plastique. Rincez brièvement le bloc de gel de collagène avec 1X PBS et fixez-le avec 4 % de PFA dans du PBS pendant 30 minutes à température ambiante. Après cela, lavez le bloc de gel de collagène avec 1,5 millilitres de 1X PBS sur un shaker pendant 15 minutes.
Appliquez une fine couche de composé OCT au fond d’un nouveau moule d’histologie en plastique. Ensuite, placez le bloc de gel de collagène fixé et lavé sur le composé OCT avant de remplir soigneusement le reste du moule avec du composé OCT. Maintenez le moule à 4 degrés Celsius pendant 1 heure. Après cela, congelez le moule sur une boîte de Pétri de 100 millimètres flottant sur de l’azote liquide et stockez les échantillons à moins 80 degrés Celsius.