Cryoconservation du cerveau murin par congélation instantanée : une technique pour congeler rapidement un échantillon entier de cerveau de souris pour une analyse histologique

Pour cryoconserver un échantillon de cerveau murin par congélation instantanée, commencez par prendre un bécher rempli d’une solution d’isopentane - un liquide hautement conducteur - et plongez-le dans un bocal contenant de l’azote liquide.

Congelez l’isopentane jusqu’à ce que la solution devienne visqueuse.

Pendant ce temps, prélevez un échantillon entier de cerveau de souris préfixé dans une solution de saccharose. Ce traitement empêche la déformation du tissu cérébral dans les étapes suivantes.

Retirez l’échantillon de cerveau de la solution de saccharose et épongez-le pour éliminer toute trace de saccharose.

Ensuite, positionnez le cerveau dans l’orientation souhaitée dans un cryomoule profond contenant une couche de milieu d’enrobage.

Superposez le cerveau dans le cryomoule avec plus de support d’enrobage pour vous assurer que tout l’organe est couvert.

Ensuite, immergez le cryomoule contenant le cerveau intégré dans le bain d’isopentane pré-refroidi. Le refroidissement rapide du tissu cérébral à une température ultra-basse assure la conservation de l’architecture cérébrale sans aucune distorsion.

Maintenant, laissez l’échantillon de cerveau geler jusqu’à ce que le milieu d’enrobage se solidifie en formant une couche gélatineuse autour du cerveau, le maintenant en place.

Une fois congelé, retirez le cryomoule du bain d’isopentane et enveloppez le cerveau de souris cryoconservé dans une feuille d’aluminium.

Conservez l’échantillon à moins quatre-vingts degrés Celsius pour une analyse histologique plus approfondie.

Pour préparer la cryoconservation, remplissez un bocal d’isopentane/2-méthylbutane froid et placez le bocal dans un récipient rempli d’azote liquide. Pendant que le solvant refroidit, épongez le cerveau sur un morceau de papier filtre et placez le cerveau dans un cryomoule étiqueté.

Ajoutez soigneusement environ 5 millilitres de fluide de coupe à température optimale au centre du cryomoule et placez le cerveau dans le moule dans l’orientation souhaitée. À l’aide d’une pince propre, placez rapidement le cryomoule dans l’isopentane/2-méthylbutane réfrigéré pendant 30 à 40 secondes.

Une fois que le milieu de coupe s’est solidifié, transférez le cryomoule sur de la glace sèche et enveloppez le cryomoule et le tissu cérébral congelé dans du papier d’aluminium pour un stockage à moins 80 degrés Celsius.